Uproszczony i solidny protokół izolacji i długoterminowej ekspansji pierwotnych komórek nabłonka endometrium człowieka

Maryam Mohammed Abbas Karekad; Linfeng Qian; Xuanwei Wu; Duanmei Liu; Xiaoai Lv; Musheng Xu; Xiaohong Xu

doi:10.3791/70429

Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Uproszczony i solidny protokół izolacji i długoterminowej ekspansji pierwotnych komórek nabłonka endometrium człowieka

276 wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/70429

⸱

10 kwietnia 2026

Maryam Mohammed Abbas Karekad^*¹ , Linfeng Qian^*² , Xuanwei Wu² , Duanmei Liu² , Xiaoai Lv³ , Musheng Xu⁴ , Xiaohong Xu³^,⁵^,⁶

¹The International Education College of Zhejiang Chinese Medical University, ²The First Clinical Medical College of Zhejiang Chinese Medical University, ³Department of Breast Surgery, The First Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medical University (Zhejiang Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine), ⁴Quzhou TCM Hospital at the Junction of Four Provinces Affiliated to Zhejiang Chinese Medical University, ⁵Bozhou District Hospital of Traditional Chinese Medicine, ⁶The Affiliated Traditional Chinese Medicine Hospital of Shihezi University

^* These authors contributed equally

W tym artykule

Podsumowanie

Podstawowa hodowla ludzkich komórek nabłonkowych endometrium (HEEC) jest technicznie wymagająca. Protokół ten łączy trawienie mieszanych enzymów z inhibitorem ROCK (Y-27632), aby poprawić przeżywalność i ekspansję komórek, jednocześnie zachowując tożsamość nabłonka, zapewniając solidną platformę do badań endometrialnych i zastosowań regeneracyjnych.

Streszczenie

Badania nad zaburzeniami endometrialnymi, w tym hiperplazją endometrium związaną z tamoksifenem, były ograniczone przez brak solidnych modeli nabłonka in vitro . Tradycyjne metody izolowania ludzkich komórek nabłonka endometrium (HEEC) są często nieefektywne, technicznie wymagające i słabo skalowalne. Opisano tutaj uproszczony, bezkarmicielowy protokół integrujący trawienie mieszane enzymów, lizę erytrocytów oraz leczenie inhibitorem ROCK (Y-27632), umożliwiając efektywną izolację i rozszerzanie pierwotnych HEEC. Obecność Y-27632 jest kluczowa dla łagodzenia apoptozy wywołanej dysocjacją i poprawy adhezji komórek we wczesnym stadium. To podejście wspiera przejście seryjne przy zachowaniu tożsamości nabłonkowej dla co najmniej 3 przejść, przy zachowaniu morfologii powyżej 10 przejść. Charakterystyka metodą Western blot i immunofluorescencji potwierdza wysoką ekspresję cytokeratyny 18 i E-kadheryny, z postępującym spadkiem zanieczyszczeń stromalnych z wimentyną dodatnimi w warunkach selektywnej hodowli. Dzięki rozwiązaniu kluczowych ograniczeń technicznych, metoda ta zapewnia niezawodne, skalowalne źródło komórek nabłonkowych do badań mechanistycznych, modelowania chorób, badań lekowych oraz zastosowań regeneracyjnych w badaniach endometrialnych. Standaryzowany przepływ pracy stanowi alternatywę dla złożonych systemów kokultury, ułatwiając szerszy dostęp do wysokiej jakości modeli komórek pierwotnych.

Wprowadzenie

Wiarygodne modele in vitro są niezbędne do rozwoju badań nad zaburzeniami endometrialnymi, szczególnie tymi związanymi z tamoksifenem (TAM)¹. Chociaż TAM jest szeroko stosowany jako terapia endokrynna w leczeniu raka piersi, jego częściowa aktywność estrogen-agonistyczna w endometrium znacząco zwiększa częstość występowania przerostu endometrium (endometrial), polipów, a w niektórych przypadkach także przemiany złośliwej². Obecne kliniczne leczenie patologii endometrium związanej z tamoksifenem opiera się głównie na terapii progesteronową lub interwencji chirurgicznej, które mają istotne ograniczenia. Leczenie p....