Artykuł badawczy

Bioaktywny składnik z wahadła toży łagodzi zapalenie reumatoidalne zapalenia stawów u szczurów poprzez regulację szlaku PI3K/Akt

DOI:

10.3791/70473

⸱

21 kwietnia 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1School of Pharmacy, Qinghai MinZu University, 2Qinghai Modern Plateau Biomedical Industry Institute, 3Qinghai Institute of Tibetan Medicine, 4Qinghai Provincial Key Laboratory of Plant Resource Chemistry on the Tibetan Plateau

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Za pomocą farmakologii sieciowej i molekularnego dokowania zidentyfikowano składniki przeciwreumatoidalnego zapalenia stawów (RA) z A. pendulum . Badania in vivo wykazały, że alkaloidy diterpenowe, zwłaszcza smirnotyna A, łagodzą objawy RZS u szczurów za pomocą szlaku PI3K/Akt.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

W tradycyjnej medycynie chińskiej oraz różnych etnicznych praktykach medycznych korzenie wahadła Aconitum N. Busch są powszechnie wykorzystywane ze względu na zdolność do wyciskania meridianow, zwalczania reumatyzmu, wspomagania krążenia krwi oraz łagodzenia artralgii. W rezultacie ta roślina lecznicza stała się cenionym sposobem leczenia skrąceń i chorób reumatycznych w różnych systemach medycznych etnicznych. Badanie to badało mechanizmy, dzięki którym sześć wcześniej izolowanych związków z A. pendulum łagodzi zapalenie reumatoidalne artrematoidalne (RA), stosując zarówno podejścia in vitro , jak i in vivo . Zastosowano kombinację technik, w tym farmakologię sieci, molekularne dokowanie, enzymatyczny immunosorbentny test (ELISA), barwienie hematoksyliny i eozyny (H&E), ilościową reakcję łańcuchową polimerazy w czasie rzeczywistym (q-PCR) oraz western blot (WB). Wyniki wykazały, że smirnotyna A, jeden z sześciu związków, łagodzi objawy RZS poprzez celowanie w szlak sygnalizacyjny PI3K/Akt i tłumienie odpowiedzi zapalnej. Te odkrycia stanowią naukowe podstawy do zrozumienia podstaw materialnych oraz mechanizmów mechanistycznych leżących u podstaw tradycyjnego stosowania A. pendulum w leczeniu RA.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Reumatoidalne zapalenie stawów (RZS) to przewlekła choroba autoimmunologiczna charakteryzująca się zapaleniem błony maziowej, przerostem błony maziowej, infiltracją komórek odpornościowych, powstawaniem inwazyjnej tkanki pannus oraz wynikającym z tego niszczeniem stawów 1,2,3. Przy globalnej częstości występowania na poziomie 0,5%–1% RS stanowi poważne obciążenie dla zdrowia publicznego i poważnie wpływa na jakość życia pacjentów 4,5,6,7. Terapie konwencjonalne — takie jak metotreksat (MTX), glukokortykoidy, inhibitory kinazy Janus (JAK) oraz niesteroidowe leki przeciwzapalne (NLPZ) — często są ograniczone przez działania niepożądane i zmienną odpowiedź pacjenta, co podkreśla potrzebę nowych terapii8.

Produkty naturalne, zwłaszcza alkaloidy, zyskały uwagę dzięki wielocelowym mechanizmom i korzystnym profilom bezpieczeństwa w leczeniu RZS. Alkaloidy, takie jak berberyna, sinomenina i matryna, modulują kluczowe szlaki zapalne, w tym mitogenem aktywowaną kinazę białkową (MAPK), czynnik jądrowy kappa B (NF-κB), fosfatydylininozytol 3-kinazę/kinazę białkową B (PI3K/Akt) oraz kinazę Janus/przetwornik sygnału i aktywator transkrypcji (JAK/STAT) oraz obniżają poziom cytokin, takich jak czynnik martwicy nowotworów alfa (TNF-α), interleukina (IL)-1β, oraz IL-6, wykazując potencjał terapeutyczny 9,10.

W medycynie tybetańskiej RZS klasyfikuje się jako brum bu (wilgotna artralgia), przypisywana zaburzeniom równowagi trzech humorów oraz gromadzeniu się niedojrzałej żółtej wody w stawach11,12 (Rysunek 1). Aconitum pendulum N. Busch to tradycyjnie stosowane zioło do usuwania wilgoci, wspomagania krążenia i łagodzenia bólu13,14. Udokumentowano ponad 50 klasycznych tybetańskich formuł zawierających to zioło, a historia zastosowania klinicznego obejmuje ponad 300 lat,15, 16 lat. Jednak jego bioaktywne składniki i mechanizmy pozostają słabo scharakteryzowane.

Łączymy tutaj farmakologię sieciową i dokowanie molekularne, aby przewidzieć anty-RA składników Aconitum pendulum N. Busch oraz ich potencjalnych celów i szlaków. Te przewidywania są następnie eksperymentalnie weryfikowane (Rysunek 2). To zintegrowane podejście ma na celu wyjaśnienie materialnych podstaw i mechanistycznych podstaw Aconitum pendulum N. Busch w leczeniu RZS, zapewniając podstawę dla przyszłego rozwoju leków.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Pięćdziesiąt samców szczurów Sprague-Dawley o specyficznej wolności od patogenów (SPF) (ważących 180–200 g) zostało dostarczonych przez Prowincjonalne Centrum Kontroli i Prewencji Chorób Hubei (Akademia Medycyny Prewencyjnej Prowincji Hubei) (Wuhan, Chiny; Certyfikat licencji na zwierzęta nr SCXK(JB) 2023-0005). Wszystkie procedury eksperymentalne z udziałem zwierząt były przeprowadzane ściśle zgodnie z Przewodnikiem Narodowych Instytutów Zdrowia dotyczącym opieki i wykorzystania zwierząt laboratoryjnych (wydanie 8, 2011). Protokół badania został przeanalizowany i zatwierdzony przez Komitet Etyki Zwierząt Eksperymentalnych Tianjin Genink Biological Technology Co., Ltd. (Nr Zatwierdzenia GENINK-20250074). Kluczowe odczynniki i sprzęt użyty w tym badaniu są wymienione w dołączonej Tabeli Materiałów.

Hodowla komórkowa
Linia komórkowa reumatoidalnego zapalenia stawów (RA) MH7A została wyhodowana w podłożu Dulbecco Modified Eagle Medium (DMEM), uzupełnionym surowicą płodową (FBS) o stężeniu 10% (v/v) i utrzymywanym w temperaturze 37 °C w nawilżonym inkubatorze z 5% CO₂17.

Zwierzęta i zabiegi
Zwierzęta były trzymane w standardowym ośrodku wolnym od patogenów specyficznych (SPF) z systemem indywidualnie wentylowanej klatki (IVC) w ściśle kontrolowanych warunkach środowiskowych: temperatura kontrolowana klimatem 21,0–25,0 °C, wilgotność względna 40–70%, fotookres 12 godzin oraz pełna wymiana powietrza 15 razy na godzinę. Po 7-dniowym okresie aklimatyzacji szczury zostały losowo podzielone na sześć grup eksperymentalnych, a dodatkowe szczury zostały zarezerwowane jako zapasowe na wypadek nieprzewidzianych okoliczności. Model ostrego zapalnego adiuwantującego zapalenia stawów (AA) został wywołany podskórnym wstrzyknięciem 100 μL pełnego adiuwantu Freunda (CFA; 10 mg·mL-1) do prawej tylnej łapy18. Grupy eksperymentalne zostały zaprojektowane następująco: grupa kontrolna z pustą dawką, grupa modelowa AA, grupa pozytywna (metotreksat, 0,9 mg·kg-1)19 oraz trzy grupy leczące smirnotyną A podawane w niskich (0,962 mg·kg-1), średnich (1,923 mg·kg-1) i wysokich dawkach (3,846 mg·kg-1) w zależności od wartości IC₅₀.

Przewidywanie chorób i celów złożonych
Na podstawie wstępnych badań aktywności przeprowadzonych przez naszą grupę badawczą wybrano sześć związków wykazujących korzystną aktywność biologiczną: pięć diterpenoidów alkaloidowych (Rysunek 3), benzoylakonina (1), 14-benzoyl-8-O-metylakonina (2), (−)-(A-b)-14α-benzoyloksy-N-etylo-13β, 15α-dihydroksy-1α,6α,8β,16β,18-pentametakoksyakonitan (3), smirnotyna A (4) oraz akotynyna (5), a także jeden pochodny kumaryny, Skopoletin (6)20. Uproszczone notacje systemu wprowadzania liniek molekularnych (SMILES) tych związków zostały pobrane z bazy danych PubChem (https://pubchem.ncbi.nlm. nih.gov/) lub wygenerowane za pomocą ChemDraw 18.0. Te notacje zostały następnie zaimportowane do bazy danych SwissTargetPrediction (https://swisstargetprediction.ch/), gdzie gatunek określony jako "Homo sapiens". Potencjalne cele zidentyfikowano poprzez wybór genów o wartości prawdopodobieństwa > 0, a odpowiadające im nazwy celów i identyfikatory UniProt zebrano21,22.

Sieci PPI
Nakładające się geny docelowe zostały przeanalizowane przez sieć interakcji białko-białko (PPI) z wykorzystaniem bazy danych STRING (https://string-db.org/)23. Uzyskane dane w formacie TSV zostały następnie zaimportowane do Cytoscape 3.9.1 w celu dalszej wizualizacji i analizy. Parametry topologiczne sieci były obliczane za pomocą wbudowanej wtyczki Network Analyzer . W wizualizowanej sieci rozmiar węzła i intensywność koloru były mapowane na wartość stopnia, natomiast grubość krawędzi odzwierciedlała siłę interakcji między celami. Główne cele zostały zidentyfikowane i uszeregowane na podstawie stopnia stowarzyszenia24.

Analiza wzbogacania szlaków w Ontologii Genów i Genomów w Kioto (GO) oraz Encyklopedii Genów i Genomów w Kioto (KEGG)
Wspólne cele zostały przesłane do bazy danych Metascape (https://metascape.org) do analiz wzbogacania szlaków GO i KEGG25. Wyniki funkcjonalne zostały zwizualizowane za pomocą platformy bioinformatycznej WeiShengXin (https://www.bioinformatics.com.cn).

Konstrukcja sieci "składników aktywnych leków-celów-szlaków"
Aktywne komponenty i ich odpowiadające im cele były systematycznie przesiewane, a następnie przeprowadzono analizę wzbogacenia funkcjonalnego w celu identyfikacji głównych szlaków sygnalizacyjnych i powiązanych z nimi celów. Elementy te zostały następnie zintegrowane przy użyciu Cytoscape 3.9.1, aby stworzyć kompleksową sieć "składniki lek–aktywne–choroba–cele–szlaki". Następnie przeprowadzono analizę topologiczną za pomocą narzędzia Network Analyzer , w którym węzły były klasyfikowane na podstawie kluczowych parametrów, w tym stopnia i pośredniego, aby zidentyfikować centralne elementy w sieci.

Molekularne dokowanie kluczowych związków do celów rdzeniowych
Trójwymiarowe struktury białek docelowych rdzenia, w tym ESR1 (9BQE), PTGS2 (5F19), EGFR (2XKN), GSK3B (5HLN), SRC (5MTJ) oraz ERBB2 (8U8X), zostały pobrane z RCSB Protein Data Bank (http://www.rcsb.org/; dostęp 7 maja 2025). Struktury złożone zostały zbudowane w ChemDraw (wersja 18.0), a następnie przekształcone w trójwymiarowy format SDF przy użyciu zintegrowanego modułu Chem3D. Wyniki dokowania molekularnego zobrazowano za pomocą PyMOL, a powinowactwa wiązania oceniono według energii oddziaływania (kcal·mol-1)26.

Badanie żywotności komórki
Komórki MH7A w fazie wzrostu logarytmicznego zostały zasiadzone na płytach 96-dołkowych o gęstości 5 ×10 3 komórek na dołek. Po osiągnięciu 80% zbiegu komórek najpierw traktowano lipopolisacharydami (LPS) (1 μg·mL-1) przez 6 godzin, a następnie wystawiano je na różne stężenia smirnotyny A (5, 25, 50, 75 i 100 μg·mL-1). Każda grupa leczenia została ustawiona w czterokrotnym kształcie i inkubowana przez 24 godziny w temperaturze 37 °C przy 5% CO₂. Po inkubacji do każdej studni dodawano 100 μL roztworu 10% CCK8, a następnie kolejną inkubację w temperaturze 37 °C przez 2 godziny. Absorpcja przy 450 nm została zmierzona za pomocą czytnika mikropłytek.

Test ELISA w komórkach MH7A
Supernatant pobierano przez wirówkę w dawce 2000 × g przez 20 minut w temperaturze 4 °C. Poziomy cytokin zapalnych, w tym IL-6, IL-1β, TNF-α i IL-10, zostały ilościowo zmierzone w supernatancie za pomocą odpowiednich zestawów ELISA, ściśle zgodnie z instrukcjami producenta.

Pomiar stopnia obrzęku palca u stóp
Stopień obrzęku prawej tylnej łapy oceniano poprzez pomiar objętości łapy co 3 dni po modelowaniu. Pomiary wykonywano dwukrotnie na szczura i uśredniano. Odpowiedź zapalną została zmierzona jako procentowy wzrost objętości łapy w stosunku do stanu wyjściowego.

figure-protocol-1

Pomiar indeksu organowego
Wszystkie szczury zostały znieczulone i uśpione 24 godziny po ostatnim podaniu. Stosowana jest humanitarna metoda uznawana przez międzynarodową społeczność weterynaryjną. Po pierwsze, do głębokiego znieczulenia zwierzęcia stosuje się wysokie stężenie (5%) izofluranu. Gdy zwierzę traci przytomność i wszelkie refleksy, klatka piersiowa zostaje otwarta, a serce przecinane, zapewniając, że zwierzę umiera bezbolesnie i bez żadnego wrażenia. Śledziona i grasica zostały natychmiast usunięte i zważone. Po płukaniu solą fizjologiczną nadmiar wilgoci z powierzchni tkanek usunięto przez przecieranie papierem filtracyjnym, a wilgotna masa narządów została zarejestrowana napoziomie 27,28.

figure-protocol-2

Hematoksylina i eozyna (HE)
Aby zachować integralność próbek tkanek łapy, zebrano i przechowano całą część znajdującą się dystalnie od prawego stawu kostkowego każdego szczura. Do sekcji używano spuchniętej tkanki łapy. Procedura pobierania próbek przebiegała następująco: tkanka około 1 cm powyżej stawu prawej kostki została całkowicie rozcięta, futro usunięto, a trzon kości przecięto na końcu bliższym. Próbka została natychmiast utrwalona w roztworze 10% paraformaldehydu. Po utrwaleniu tkanka została umieszczona w 15% roztworze dewapniującym EDTA. Odwapnianie monitorowano co 3 dni, a roztwór odświeżano w razie potrzeby, aż tkanka zmiękczała, co oznaczało zakończenie odwapnienia. Tkanka była następnie odwodniona w ramach serii ethanolu o stopniu (75% przez 4 godziny, 85% przez 2 godziny, 90% przez 1,5 godziny, 95% przez 1 godzinę oraz dwie wymiany 100% etanolu przez 0,5 godziny). Fragmenty były deparafinizowane, nawodniane przez etanol, barwione hematoksyliną przez 10 minut, płukane wodą z kranu, różnicowane kwasem solnym i etanolem przez 10 sekund, płukane wodą z kranu, zaniebieszczone, ponownie płukane, zanurzone w etanolu 85% przez 5 minut, zabarwione eozyną przez 5 minut, płukane wodą z kranu przez 3 minuty, odwodnione, oczyszczone i zamontowane do obserwacji29 minut.

Badanie ELISA surowicy szczurów
Próbki krwi wirowano w dawce 2000 × g przez 20 minut w 4 °C, a powstały supernatant pobierano do analizy cytokin. Stężenia IL-1β, IL-6 i TNF-α były określane za pomocą komercyjnych zestawów ELISA, ściśle zgodnie z protokołami producenta. Standardowa krzywa została wygenerowana i dopasowana za pomocą oprogramowania cvxpt32, a poziomy ekspresji każdej cytokiny obliczono poprzez interpolację wartości absorpcji do odpowiadającego równania krzywej standardowej. Ostateczne stężenia białek zostały obliczone na podstawie rzeczywistych pomiarów eksperymentalnych.

Ilościowa analiza reakcji łańcuchowej polimerazy (qPCR)
Całkowite RNA zostało wyizolowane z komórek maziowych za pomocą odczynnika TRIzolu, a separacja fazowa została osiągnięta przez dodatek chloroform30. Następnie zastosowano komercyjny zestaw do transkrypcji odwrotnej do syntezy cDNA z izolowanego RNA, ściśle zgodnie z instrukcjami producenta. qRT-PCR wykonano z użyciem odczynnika SYBR Premix. Jako endogenny gen referencyjny zastosowano dehydrogenazę gliceraldehydu-3-fosforanu (GAPDH), a względne poziomy ekspresji genów obliczono metodą 2-ΔΔCt . Użyto następujących sekwencji początkowych: GAPDH Forward: ACAGCAACAGGGTGGTGGAC oraz GAPDH Reverse: TTTGAGGGTGCAGCGAACTT; IL-17A Forward: CTGATGCTGTTGCTGCTACTGA oraz IL-17A Reverse: TGGAACGGTTGAGGTAGTCTGA; TRAF6 Forward: ACATTTCCCTTTTTGTCCACAC oraz TRAF6 Reverse: TTAGCATCCATGACCTCTTCGTGT; IL-10 Forward: CTGCAGGACTTTAAGGGTTACTT, oraz IL-10 Reverse: CTTGCTTTTATTCTCACAGGA; IL-1β Forward: CCTGTGTGATGAAAGACGGC, oraz IL-1β Reverse: TATGTCCCGACCATTGCTGT; IL-6 Forward: GTTGCCTTCTTGGGACTGATG, oraz IL-6 Reverse: TACTGGTGTGTGTGTGTGTGGT.

Ekstrakcja białek i western bloting
Tkanka maziowa została zlikwidowana w buforze radioimmunoprecipitacyjnym (RIPA) uzupełnionym inhibitorem fosfatazy/proteazy, a stężenia białek zmierzono za pomocą zestawu do testowania kwasu bicynchoninowego (BCA). W przypadku western blottingu lizaty zawierające równe ilości białka poddawano elektroforezie sodowo-dodecylosiarczanowo-poliakrylamidowej elektroforezie (SDS-PAGE), a następnie przenoszono na membrany poliwinylidenfluorku (PVDF). Po zablokowaniu 5% mleka odtłuszczonego w soli fizjologicznej z buforem Tris i 0,1% Tween (TBST) przez 2 godziny w 25 °C, błony były inkubowane przez noc w temperaturze 4 °C z pierwotnymi przeciwciałami (GAPDH 1:50000; P-PI3K 1:1000; PI3K 1:1000; P-AKT 1:3000; AKT 1:6000). Po intensywnym myciu TBST błony zostały zareagowane z przeciwciałami wtórnymi sprzężonymi z nadoksydazą chrzanową (HRP) (Anti-Mouse IgG 1:10000; Anty-królikowy IgG 1:1000) przez 2 godziny w temperaturze pokojowej. Po kolejnej serii płukań TBST zobrazowano pasma białkowe przy użyciu podłoża o wzmocnionej chemiluminescencji (ECL). Intensywności pasm zostały zmierzone za pomocą oprogramowania ImageJ i znormalizowane do GAPDH jako kontroli obciążenia.

Analiza statystyczna
Wszystkie dane zostały przeanalizowane za pomocą oprogramowania Graphpad Prism 9.5 i przedstawione jako średnia ±± odchylenie standardowe. Porównania statystyczne przeprowadzono tam, gdzie było to stosowne, za pomocą jednokierunkowej ANOVA. Wartość p poniżej 0,05 uznano za istotną statystycznie. W porównaniu do grupy kontrolnej: *p < 0,05, **p < 0,01, p < 0,001 oraz p < 0,0001; W porównaniu do grupy Model/LPS: #p < 0,05, ##p < 0,01, ###p < 0,001 oraz ####p < 0,0001.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wpływ pochodnych A. pendulum na cel anty-RA
Struktury 3D sześciu związków zostały pobrane w formacie SDF, a liczby SMILES zostały przesłane do bazy danych SwissTargetPrediction w celu przewidywania celów. Cele o prawdopodobieństwie większym niż 0 były zachowywane, a wyniki eksportowane jako plik CSV. Po usunięciu duplikatów zidentyfikowano łącznie 97 potencjalnych celów związanych ze związkami.

Cele choroby związane z reumatoidalnym zapaleniem stawów (RA) zostały...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

To zintegrowane badanie dostarcza nowatorskich mechanistycznych wglądów w działanie przeciwreumatoidalne zapalenia stawów smirnotyny A, alkaloidu C19-diterpenoidowego z Aconitum pendulum N. Busch. Nasze wyniki pokazują, że smirnotyna A łagodzi stan zapalny RZS poprzez ukierunkowane hamowanie szlaku sygnalizacyjnego PI3K/Akt, co stanowi odrębny mechanizm niż wcześniej zgłaszane alkaloidy diterpenoidowe.

Połączenie prognozy farmakologii sieciowej i walidacji dokowania molekularnego skut...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy deklarują, że nie mają znanych konkurujących ze sobą interesów finansowych ani relacji osobistych, które mogłyby wpłynąć na prace opisane w tym artykule.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Badania te były finansowane przez projekt młodzieżowy Departamentu Nauki i Technologii Qinghai (nr 2022-ZJ-950Q) oraz Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych Chin (NSFC) (nr 82460845).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
AceQ qPCR SYBR Green Master MixVazymeQ111
AKT (60 kDa) monoklonalne przeciwciało myszeWuhan Sanying Biotechnology60203-2-Ig
Zestaw do testowania białek BCAGuangzhou Jiebeisi BiotechnologyG3522
BSA StandardGuangzhou Jiebeisi BiotechnologyG8532
Kompletne medium dla ogniw MH7AShanghai Fuheng BiotechnologyFH-MH7A
Zestaw ELISA dla IL-10Biotechnologia LunchangshuoED-13626
Zestaw ELISA dla IL-17ABiotechnologia LunchangshuoED-10344
Zestaw ELISA dla IL-1βBiotechnologia LunchangshuoED-10351
Zestaw ELISA dla IL-6Biotechnologia LunchangshuoED-10377
Zestaw ELISA dla TNF i alfa;Biotechnologia LunchangshuoED-11776
Ilościowy System PCR do fluorescencjiBiosystemy stosowaneViiA-7
Przeciwciało monoklonalne GAPDH myszeWuhan Sanying Biotechnology60004-1-Ig
Wysokoobrotowa chłodzona wirówkaSprzęt Hunan KechengHI-16KR
HiScript II Q Select RT SuperMix for qPCRVazymeR223
Przeciwciało przeciwmysie dla koz, znakowane HRPWuhan Sanying BiotechnologySA00001-1
Przeciwciało przeciwkrólikowe przeciw kozom znakowane HRPBeyotime BiotechnologyA0208
Ludzkie reumatoidalne zapalenie stawów – linia synoviocytów podobna do fibroblastów MH7AQisai BiotechnologyQS-H075
Czytnik mikropłytBioTekMQX200
MikroskopLeicaFLEXACAM C1
Wielomodowy czytnik mikropłytUrządzenia molekularneFlexStation 3
P-AKT (60 kDa) poliklonalne przeciwciało króliczegoWuhan Sanying Biotechnology28731-1-AP
Mikrotom parafinowyLeicaRM 2016
Wzmacniacz PCRBiosystemy stosowaneproFlex
Sól fizjologiczna buforowana fosforanem (1&razy; PBS)Qisai BiotechnologyQS-S001
PI3K (85 kDa) poliklonalne przeciwciało królikaPokrewieństwoAF6241
P-PI3K (85 kDa) poliklonalne przeciwciało królikaPokrewieństwoAF3242
Smirnotine Awyizolowany i zidentyfikowany przez nasze laboratoriumC39H49NO11
Suszarka tkanekWuhan Junjie ElectronicJT-12J
Maszyna do osadzania tkanekWuhan Junjie ElectronicJB-L6
Maszyna do rozprowadzania i pieczenia tkanekWuhan Junjie ElectronicJK-6
TrizolAmbion15596-026
Roztwór trawienia komórek trypsyny (0,25% trypsyny, z EDTA, bez fenolu czerwonego)Qisai BiotechnologyQS-S401

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Perera, J., Delrosso, C. A., Nerviani, A., Pitzalis, C. Clinical phenotypes, serological biomarkers, and synovial features defining seropositive and seronegative rheumatoid arthritis: a literature review. Cells. 13 (9), 743(2024).
  2. Jiang, N., Tian, X. P., Zeng, X. F. Interpretation on the 2024 Chinese for the diagnosis and treatment of rheumatoid arthritis. Med J PUMCH. 16 (1), 28-34 (2025).
  3. Nygaard, G., Firestein, G. S. Restoring synovial homeostasis in rheumatoid arthritis by targeting fibroblast-like synoviocytes. Nat Rev Rheumatol. 16 (6), 316-333 (2020).
  4. Dumoulin, Q. A., et al. Development of rheumatoid arthritis after methotrexate in anticitrullinated protein antibody-negative people with clinically suspect arthralgia at risk of rheumatoid arthritis: 4-year data from the TREAT EARLIER trial. Lancet Rheumatol. 6 (12), e827-e836 (2024).
  5. Zhang, R. Y., et al. Mechanisms of NLRP3 inflammasome in rheumatoid arthritis and osteoarthritis and the effects of traditional Chinese medicine. J Ethnopharmacol. 321, 117432(2024).
  6. Parveen, A., Wal, P., Kumar Rai, A., Wal, A. An outlook of substantial progress in nanotechnology emerged in treatment approaches for rheumatoid arthritis. Curr Drug Ther. 19 (3), 289-301 (2024).
  7. Shen, P., et al. Wutou decoction attenuates rheumatoid arthritis in rats through SIRT1-mediated deacetylation of the HMGB1/NF-κB pathway. J Ethnopharmacol. 337, 118921(2025).
  8. Wang, X. W., et al. Jingfang granules alleviates the lipid peroxidation induced ferroptosis in rheumatoid arthritis rats by regulating gut microbiota and metabolism of short chain fatty acids. J Ethnopharmacol. 339, 119160(2025).
  9. Wang, X. D., Mao, J. X. Systematic pharmacology-based strategy to investigate the mechanism of beta-sitosterol for the treatment of rheumatoid arthritis. Front Genet. 15, 1507606(2024).
  10. Liu, S., et al. Treatment of rheumatoid arthritis with alkaloids in natural medicines: a review. Mod Chin Med. 24 (4), 721-727 (2022).
  11. Tan, X. Y., et al. Rapid visual characterization of alkaloid changes in traditional processing of Tibetan medicine Aconitum pendulum by high-performance thin-layer chromatography coupled with desorption electrospray ionization mass spectrometry imaging. Front Pharmacol. 14, 1104473(2023).
  12. Yu, L. Q., et al. Traditional Tibetan medicine: therapeutic potential in rheumatoid arthritis. Front Pharmacol. 13, 938915(2022).
  13. Ai, C. Q. Sibu Yidian Sman Thang Detailed. , Qinghai Ethnic Publishing House. (2012).
  14. Zhang, X. R., et al. Medication regularity of Tibetan patent medicines for gZav-Grib disease based on data mining. Shanxi Med Periodical Press. 21 (16), 29923-29928 (2023).
  15. Liu, Y., et al. An integrated strategy of UPLC-Q-TOF/MS and HPTLC/PAD-DESI-MSI for the analysis of chemical variations: a case study of Tibetan medicine Tiebangchui. J Pharm Anal. 14 (4), 100907(2024).
  16. Li, C. Y., et al. Aconitum pendulum and Aconitum flavum: a narrative review on traditional uses, phytochemistry, bioactivities and processing methods. J Ethnopharmacol. 292, 115216(2022).
  17. Xie, C. M., et al. Triptolide suppresses human synoviocyte MH7A cells mobility and maintains redox balance by inhibiting autophagy. Biomed Pharmacother. 115, 108911(2019).
  18. Wang, X. W., et al. Exploration of protective effect and mechanism of Jingfang granules on rheumatoid arthritis based on network pharmacology and metabolomics. Chin Tradit Herb Drugs. 55 (23), 8067-8078 (2024).
  19. Yin, Q., et al. Anti-rheumatoid arthritis effects of traditional Chinese medicine Fufang Xiaohuoluo pill on collagen-induced arthritis rats and MH7A cells. Front Pharmacol. 15, 1374485(2024).
  20. Dong, D., et al. A new phenolic glycoside from roots of Aconitum pendulum. China J Chin Mater Med. 50 (22), 6380-6386 (2025).
  21. Wang, X., et al. Network pharmacology provides new insights into the mechanism of traditional Chinese medicine and natural products used to treat pulmonary hypertension. Phytomedicine. 135, 156062(2024).
  22. Nam, D. G., Kim, M., Choi, A. J., Choe, J. S. Health benefits of antioxidant bioactive compounds in ginger (Zingiber officinale) leaves by network pharmacology analysis combined with experimental validation. Antioxidants. 13 (6), 652(2024).
  23. Chen, G. Y., et al. Prediction of Rhizoma drynariae targets in the treatment of osteoarthritis based on network pharmacology and experimental verification. Evid Based Complement Alternat Med. 2021, 5233462(2021).
  24. Guo, Z. W., et al. Mechanism of crocin in improving Alzheimer's disease based on network pharmacology, molecular docking and cellular validation. Chin Tradit Herb Drugs. 56 (13), 4712-4723 (2025).
  25. Chen, G. Y., et al. Network pharmacology-based strategy to investigate the mechanisms of Cibotium barometz in treating osteoarthritis. Evid Based Complement Alternat Med. 2022, 1826299(2022).
  26. Zheng, Y. T., Xia, L. J., Zhang, X. J., Jin, M. Exploration of potential anti-inflammatory targets and key ingredients of Arisaematis rhizoma in treatment of major depressive disorder based on machine learning and molecular dynamics simulation. Chin Tradit Herb Drugs. 55 (15), 5174-5188 (2024).
  27. Guo, M., et al. Levamisole ameliorates rheumatoid arthritis by downregulating the PI3K/Akt pathway in SD rats. Pharmaceuticals. 17 (11), 1504(2024).
  28. Zhang, B. L., et al. Mechanism of Yiqi Yangyin Tongluo decoction regulating miR-885-5p/PTEN signaling pathway to regulate autophagy-inflammation in collagen-induced arthritis model rats. Liaoning J Tradit Chin Med. 52 (3), 182-189 (2025).
  29. Chen, G. Y., et al. Integrating network pharmacology and experimental validation to explore the key mechanism of Gubitong recipe in the treatment of osteoarthritis. Comput Math Methods Med. 2022, 7858925(2022).
  30. Li, J. Y., et al. Effect of Danggui Niantongtang on key factors of extrinsic and intrinsic apoptotic pathway in synovial tissue of adjuvant arthritis rats. Chin J Exp Tradit Med Form. 27 (4), 1-7 (2021).
  31. Xia, Z. X., Li, Q., Tang, Z. Y. Network pharmacology, molecular docking, and experimental pharmacology explored Ermiao wan protected against periodontitis via the PI3K/AKT and NF-κB/MAPK signal pathways. J Ethnopharmacol. 303, 115900(2023).
  32. Sabbah, D. A., Hajjo, R., Sweidan, K. Review on epidermal growth factor receptor (EGFR) structure, signaling pathways, interactions, and recent updates of EGFR inhibitors. Curr Top Med Chem. 20 (10), 815-834 (2020).
  33. Guo, X., et al. The antiangiogenic effect of total saponins of Panax japonicus CA Meyer in rheumatoid arthritis is mediated by targeting the HIF-1α/VEGF/ANG-1 axis. J Ethnopharmacol. 333, 118422(2024).
  34. Jiang, L., et al. Elucidating the role of Rhodiola rosea L. in sepsis-induced acute lung injury via network pharmacology: emphasis on inflammatory response, oxidative stress, and the PI3K-AKT pathway. Pharm Biol. 62 (1), 272-284 (2024).
  35. Bai, Y. M., Liang, S., Zhou, B. Yangyinghuoxue decoction exerts a treatment effect on hepatic fibrosis by PI3K-AKT pathway in rat model: based on network pharmacology and molecular docking. Aging (Albany NY). 16 (4), 3773(2024).
  36. Ba, X., et al. WTD attenuating rheumatoid arthritis via suppressing angiogenesis and modulating the PI3K/AKT/mTOR/HIF-1α pathway. Front Pharmacol. 12, 696802(2021).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Odpowied zapalnafarmakologia sieciowadokowanie molekularneenzymatyczny test immunoabsorpcyjnyWestern blotReal Time PCRtradycyjna medycyna chi ska
Film wkrótce dostępny

Powiązane artykuły