Artykuł metodologiczny

Szybkie Technika Wizualizacja żywo unieruchomionych komórek drożdży

DOI:

10.3791/84

9 listopada 2006

W tym artykule

Podsumowanie

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Szybkie techniki wizualizacji coraz unieruchomionych komórek drożdży, tutaj stosowane do świetlówek dziennikarzom w cichej krycia loci HML i HMR

Streszczenie

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Prezentujemy proste, szybkie i bardzo elastyczne technikę do immobilizacji i wizualizacji rosnących komórek drożdży epifluorescencją mikroskopii. Technika jest odpowiedni zarówno do wizualizacji statycznych populacji drożdży i eksperymentów kursy czas do dziesięciu godzin w długości. My mikroskopii bada Dziedziczenie epigenetyczne w cichej loci krycia w S. cerevisiae. Istnieją dwa ciche loci krycia, HML i HMR, które nie są normalnie wyrażane są one pakowane w heterochromatyny. W sir1 wyciszanie mutant tle jest osłabiony tak, że każdy locus może być w wyraźnych lub wyciszony stan epigenetyczne, więc w całej populacji jest połączenie komórki z różnych państw epigenetyczne dla HML i HMR. My mikroskopia wykazała, że ​​nie ma żadnego związku między epigenetyczne stan HML i HMR w poszczególnych komórek. sir1 komórek stochastycznie przełącznik epigenetyczne państwa, ustanawiający wyciszania na wcześniej wyrażone locus lub wyrażając wcześniej wyciszony locus. My mikroskopii oczywiście czas śledzone poszczególnych sir1 komórek i ich potomstwa na zdobycie częstotliwości każdego z czterech możliwych przełączników epigenetyczne, a tym samym stabilność każdego z państw epigenetyczne w sir1 komórek. Zobacz także Xu et al. Mol. Piosenki 2006 roku.

Protokół

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Unieruchomionych komórek oczywiście mikroskopii czas epifluorescencją. Należy pamiętać, że protokół ten jest przydatna tylko gdy obiektywy swojego mikroskopu są pod sceną mikroskopem.

  2. Komórek miejsce pożądanego stężenia w płynie mediów na długo szkiełko (ok. 24x50mm)

  3. Cut bloku agar o pożądanej wielkości z syntetycznych płyta media (te mają niższe autofluorescencję) i umieścić w komórkach. Miejsce z boku bloku agar nie obsługiwane przez pincety w kontakcie z komórkami.

  4. W przypadku krótszych okresów czasu (do 3 godzin), takie ustawienie jest wystarczające. Jeżeli komórki są w ruchu, gdy wyświetlone na mikroskopem, zmniejszenie objętości komórek lub obszaru wzrost bloku agar.

  5. W przypadku dłuższych okresów czasu, miejsce spadek świeżych ciekłych na szczycie bloku agar, i umieścić szkiełka w górnej części bloku agar. Ten slajd zmniejsza parowanie przez szczyt bloku agar. W razie potrzeby, krawędzie bloku agar w kontakcie z poślizgu okładka może być zamknięte z wazeliną w celu dalszego zmniejszenia wilgoci. Używałem tego zestawu do filmów do 9 godzin, z dzielących się komórek w dzikie stawki typu.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Jest to szybka technika, która unieruchamia komórek drożdży, umożliwiając jednocześnie wzrostu. Śledzimy rozwój drożdży do dziesięciu godzin, z drożdży wyświetlania dzikich stóp podział typu w trakcie eksperymentu. Zauważ, że ta instalacja wymaga obiektywu być pod sceną mikroskopem.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Chcielibyśmy podziękować Pete Houston i Eugenia Xu za pomoc.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Bibliografia

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Xu, E. Y., Zawadzki, K. A., Broach, J. R. Single-cell observations reveal intermediate transcriptional silencing states. Mol. Cell. 23, 219-229 (2006).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Yeast Cell ImmobilizationEpifluorescence MicroscopyAgar Pad TechniqueLive Cell VisualizationTime Course MicroscopyEpigenetic State TrackingSir1 Mutant AnalysisHML HMR LociYeast Population MonitoringSynthetic Media Seal

Powiązane artykuły