Question 1

Jaka jest budowa bakteriofaga?

Accepted Answer

Bakteriofagi to wirusy składające się z genomu kwasu nukleinowego, DNA lub RNA, otoczonego białkową otoczką zwaną kapsydem. Niektóre fagi posiadają dodatkową otoczkę lipidową oraz przypominające kolce wypustki powierzchniowe lub ogonki. Cząstki te są ultramikroskopijne — zbyt małe, aby można było je obserwować za pomocą mikroskopu świetlnego; są widoczne wyłącznie przy użyciu mikroskopu elektronowego.

Question 2

W jaki sposób bakteriofagi infekują komórki bakteryjne i rozmnażają się w ich wnętrzu?

Accepted Answer

Bakteriofagi przyłączają się do powierzchni komórki bakteryjnej i wstrzykują swój materiał genetyczny do gospodarza. Genom wirusa jest replikowany, a białka kapsydu produkowane przy użyciu aparatu biochemicznego komórki gospodarza. Po zmontowaniu cząsteczek faga są one uwalniane poprzez lizę komórki gospodarza, co często prowadzi do rozpadu i śmierci bakterii.

Question 3

Czym jest test plackowy i w jaki sposób służy on do pomiaru stężenia fagów?

Accepted Answer

Metoda płytkowa (plaque assay) polega na zmieszaniu fagów z bakteriami i miękkim agarem, który następnie nakłada się na standardowe płytki agarowe. Bakterie tworzą ciągły trawnik, a w miejscach, w których fagi infekują i lizują bakterie, powstają przejaśnienia w postaci placków. Policzenie poszczególnych placków i obliczenie liczby jednostek tworzących placki (PFU) na mililitr pozwala określić pierwotne stężenie fagów w próbce.

Question 4

Dlaczego kolifagi są użytecznymi wskaźnikami zanieczyszczenia wody?

Accepted Answer

Kolifagi infekują E. coli, powszechną bakterię jelitową świadczącą o zanieczyszczeniu fekalnym. Stanowią one wiarygodne wskaźniki zastępcze dla chorobotwórczych enterowirusów, które również są przenoszone drogą fekalną, lecz są trudne do analizy. Szybkie i niedrogie metody liczenia sprawiają, że kolifagi są atrakcyjnymi narzędziami do oceny zanieczyszczenia fekalnego w środowiskowych próbkach wody.

Question 5

Jakie warunki są niezbędne do przygotowania bakterii do testu plackowego?

Accepted Answer

Bakterie muszą znajdować się w fazie logarytmicznej wzrostu, aby zapewnić, że każda z nich jest żywa i umożliwia fagom produkcję potomstwa. Na trzy godziny przed przeprowadzeniem analizy zaszczepić kulturę nocną do świeżego bulionu i inkubować w temperaturze 35–37°C z wytrząsaniem. Takie ramy czasowe zapewniają osiągnięcie przez bakterie optymalnej aktywności metabolicznej niezbędnej do wspierania replikacji fagów.

Question 6

W jaki sposób można dostosować testy plackowe do wykrywania wirusów innych niż bakteriofagi?

Accepted Answer

Metody pławkowe można przeprowadzać z wirusami ssaków, takimi jak wirus grypy, poprzez hodowlę komórek ssaków w formie monowarstw w naczyniach do hodowli tkankowej. Dodaje się pożywkę zawierającą wirusy w celu zainfekowania komórek, a następnie nakłada na nie medium immobilizujące, takie jak agaroza. Po inkubacji trwającej do dwóch tygodni zainfekowane komórki są utrwalane i barwione, aby umożliwić wizualizację i zliczenie pławek.

Question 7

W jaki sposób uzyskuje się poszczególne izolaty fagów z próbek środowiskowych przy użyciu metody płytek z plakami?

Accepted Answer

Fagi są pobierane z próbek środowiskowych, takich jak gleba, poprzez filtrację, a następnie wykorzystywane do zakażania podatnych bakterii w teście plackowym. Pojedyncze placki są wybierane i wykreślane na nowych płytkach z agarem, pokrytych warstwą top agaru zawierającego bakterie. Stężenie fagów maleje wzdłuż kreski, co pozwala na wyizolowanie i dalszą analizę pojedynczych placków pochodzących od konkretnych typów fagów.

Wykrywanie bakteriofagów w próbkach środowiskowych - Quiz oceniający