Name: Obrazowanie bioluminescencyjne regulacji w górę oksygenazy hemowej-1 w procedurze Gua Sha (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-08-28T09:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 39 s
Description: Poznaj obrazowanie bioluminescencyjne regulacji oksygenazy hemowej-1 w myszach po zabiegu Gua Sha. Ta metoda pozwala monitorować ekspresję HO-1 w wielu narządach w czasie rzeczywistym.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

K. Wong oraz S.T.C. Wong otrzymali wsparcie finansowe z Functional and Molecular Imaging Center w Brigham and Women's Hospital 
K. Wong oraz S.T.C. Wong otrzymali wsparcie z Center for Biotechnology and Informatics w The Methodist Hospital Research Institute, Weill Cornell Medical College. 
K.K. Kwong, I. Chen oraz J-Q Ren otrzymali wsparcie finansowe z Athinoula A. Martinos Center for Biomedical Imaging w Massachusetts General Hospital. 
Lenuta Kloetzer oraz Braden Kuo otrzymali wsparcie finansowe z Neuroenteric Research Center w Massachusetts General Hospital 
Autorzy dziękują dr. Q. Zeng oraz dr. X. Xu z Optical Imaging Lab w Brigham and Women’s Hospital za pomoc techniczną.

<ol>
 <li>Samicze HO-1-lucyferaza myszy transgeniczne (w wieku od 4 do 6 tygodni) można nabyć z firmy Taconic Farms, Inc. Po dostarczeniu, Myszy umieszcza się w pomieszczeniu zoologicznym na co najmniej 4 dni w celu aklimatyzacji. </li>
 <li>Przygotowanie do obrazowania bioluminescencyjnego: 
 <ol style="list-style-type:lower-alpha;">
 <li>Zważ każdą mysz HO-1. Masa ciała zwierzęcia jest niezbędna do obliczenia dawki lucyferyny. </li>
 <li>Usuwanie owłosienia: Za pomocą patyczka higienicznego nanieś depilator Nair® na brzuch i/lub grzbiet zwierzęcia. Odczekaj od 5 do 10 sekund. Użyj czystego patyczka higienicznego, aby usunąć włosy. Namocz kawałek chusteczki w wodzie destylowanej i przemyj skórę, aby usunąć pozostałe włosy.</li>
 <li>Umieść niefluorescencyjny czarny papier (papier Strathmore Artagain® black paper) na platformie obrazowania stacji IVIS 100, aby zredukować szum tła. </li>
 <li>Przygotować roztwór lucyferyny (firmy Xenogen Corporation) o stężeniu 7,5 mg/ml (rozpuszczonej w sterylnym H2O). Dawka lucyferyny wynosi 65,5 mg/kg masy ciała. Zatem mysz o masie 20 gramów wymaga wewnątrzbrzusznego wstrzyknięcia 0,175 ml roztworu lucyferyny. W tym celu pojedynczą objętość roztworu lucyferyny (0,175 ml) pobiera się do strzykawki z igłą o rozmiarze 26G. </li>
 </ol></li>
 <li>Procedura Gua Sha: Procedurę Gua Sha stosuje się tylko raz przed przeprowadzeniem protokołu obrazowania bioluminescencyjnego. Ponieważ Gua Sha nie wywołuje bólu, mysz wymaga jedynie krótkiego znieczulenia izofluranem w celu zapewnienia spokoju. Procedura Gua Sha obejmuje następujące kroki:
 <ol style="list-style-type:lower-alpha;">
 <li>Nanieś kilka razy w ciągu procedury Gua Sha olej do smażenia lub wodę destylowaną w celu nawilżenia obszarów skóry poddawanych zabiegowi. </li>
 <li>Wielokrotnie zdrapuj obszar bez włosów na grzbiecie myszy, wywierając delikatny, lecz stanowczy nacisk za pomocą ceramicznej łyżki do zupy lub łyżki plastikowej.</li>
 <li>Skrobanie kontynuuje się do momentu, aż skóra grzbietu stanie się czerwona, co świadczy o podskórnym wynaczynianiu krwi; zazwyczaj osiąga się to w ciągu 2 do 3 minut. </li>
 </ol></li>
 <li>Obrazowanie bioluminescencyjne można rozpocząć natychmiast lub kilka godzin po zabiegu Gua Sha, ponieważ zwiększenie ekspresji HO-1 narasta powoli w ciągu kilku godzin. Procedura obrazowania bioluminescencyjnego przebiega następująco:
 <ol style="list-style-type:lower-alpha;">
 <li>Zanurz mysz w narkozie w komorze indukcyjnej wypełnionej mieszaniną izofluranu (1,5%) i powietrza medycznego.</li>
	<li>Po znieczuleniu myszy należy przenieść ją do komory obrazowej stacji obrazowania optycznego IVIS 100. Umieścić mysz w pozycji złotej (brzuchem do góry). Komora obrazowa jest stale nasycana 1,5% izofluranem. Platforma obrazująca jest podgrzewana do 37°C aby utrzymać mysz w cieple.</li>
	<li>Ustaw akwizycję obrazowania na „medium binning” (średnie binowanie) i ustaw czas ekspozycji na 30 sekund. Rozpocznij akwizycję obrazów. Ustaw urządzenie tak, aby powtarzało akwizycję obrazowania co trzy minuty, ręcznie lub automatycznie. Po uzyskaniu pierwszego obrazu należy wyznaczyć obszar zainteresowania (ROI), obejmujący obszary brzucha, klatki piersiowej i głowy. Następnie ten ROI jest kopiowany i wklejany do kolejnych obrazów przy użyciu oprogramowania Living Image®, dołączonego do stacji IVIS 100.</li>
	<li>Intensywność sygnału jest mierzona w fotonach na sekundę. Należy odnotować czas, w którym intensywność sygnału osiągnie wartość maksymalną, a następnie kontynuować obrazowanie myszy przez około 5 do 10 minut po tym czasie.</li>
	<li>Po zakończeniu akwizycji obrazów w pozycji wygrzbietowej, odwróć mysz i połóż ją w pozycji brzusznej (grzbietem do góry). Kontynuuj obrazowanie zwierzęcia przez 5 do 10 minut, wyznaczając w oprogramowaniu „Living Image®” obszar ROI tak, aby obejmował on plecy i okolice głowy. Wybór kolejności obrazowania w pozycji brzusznej po pozycji wygrzbietowej jest dowolny. W zależności od głównych organów będących przedmiotem zainteresowania, można zdecydować się na rozpoczęcie od pozycji brzusznej. Inną opcją jest obrazowanie w pozycji wygrzbietowej i brzusznej podczas osobnych eksperymentów.</li>
	<li>Po zakończeniu akwizycji obrazów w pozycji brzusznej należy wyłączyć izofluran i przenieść mysz z komory obrazowania do komory indukcyjnej w celu wybudzenia. Komora indukcyjna jest w tym czasie przepływana wyłącznie powietrzem medycznym, a mysz zazwyczaj budzi się w czasie krótszym niż jedna minuta.</li>
	<li>Zapisz dane obrazowania do późniejszego przetwarzania.</li>
	<li>Po wstępnym badaniu obrazowym, przez kilka dni po zabiegu Gua Sha przeprowadzane są dodatkowe akwizycje obrazów. Przykładowy harmonogram obejmuje powtórne obrazowanie w 12.th godzina, 24th godzina, 36th godzina, 48th godzina, 72nd godzina i 120th godzinę, jednak dokładny harmonogram obrazowania jest elastyczny. Można dodać dodatkowe sesje obrazowania, jeśli wymagana jest dłuższa obserwacja. Przed obrazowaniem należy powtórzyć procedurę usuwania włosów, jeśli odrosły one ponownie.</li>
 </ol>
 </li>
 <li>W przypadku grupy kontrolnej należy powtórzyć całą procedurę, z pominięciem etapu Gua Sha (krok 3). Jeśli ta sama grupa myszy jest wykorzystywana zarówno do grupy kontrolnej, jak i do grupy Gua Sha, eksperyment kontrolny powinien zostać przeprowadzony najlepiej przed procedurą Gua Sha lub co najmniej miesiąc po niej.</li>
</ol>
Reprezentatywne wyniki:
Obrazy bioluminescencyjne na rysunku 1 pokazują zwiększenie ekspresji in vivo HO-1 w odpowiedzi na Gua Sha. Wykres na rysunku 2 przedstawia ilościową zmianę czasową w ciągu 120 godzin strumienia optycznego (fotony/sek) z całego ciała tej samej myszy w związku z Gua Sha...
<img src="/files/ftp_upload/1385/figure1tmb.jpg" alt="Obrazowanie bioluminescencyjne, wyniki eksperymentalne, modele mysie, kwantyfikacja fluorescencji, skala kolorystyczna." border="0" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="rycina 1"> Rycina 1. Od lewej do prawej: reprezentatywne obrazy widoku przedniego (grzbietowego) tej samej myszy odpowiednio przed zabiegiem Gua Sha oraz 18, 36 i 120 godzin po zabiegu Gua Sha. Po zabiegu Gua Sha obserwuje się postępujący i znaczny wzrost intensywności sygnału w wielu organach, obejmujący obszary przewodu pokarmowego, dróg rodnych, wątroby, nerek (widok z tyłu, niewykazany) i innych. Prosimy <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1385/figure1.jpg">kliknąć tutaj</a>, aby zobaczyć powiększoną wersję ryciny 1.
<img src="/files/ftp_upload/1385/figure2tmb.jpg" alt="Wykres szybkości emisji fotonów w czasie; analiza danych badania fotonicznego; zaznaczone punkty czasowe." border="0" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="rycina 2"> Rycina 2. Ilościowa zmiana strumienia (fotony/sek) z całego ciała monitorowana przez 120 godzin po zabiegu Gua Sha u tej samej myszy, co na rycinie 1. Prosimy <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1385/figure2.jpg">kliknąć tutaj</a>, aby zobaczyć powiększoną wersję ryciny 2.

<ol><li>Zhang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selection+of+potential+therapeutics+based+on+in+vivo+spatiotemporal+transcription+patterns+of+heme+oxygenase-1%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Selection of potential therapeutics based on in vivo spatiotemporal transcription patterns of heme oxygenase-1.</a> J Mol Med. 80, 655-6564 (2002).</li>
<li>Zhang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+in+vivo+functional+analysis+of+transgenes+in+mice+using+whole+body+imaging+of+luciferase+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Transgenic+Res%22%5BJournal%5D)">Rapid in vivo functional analysis of transgenes in mice using whole body imaging of luciferase expression.</a> Transgenic Res. 10, 423-434 (2001).</li>
<li>Contag, C. H., Stevenson, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+patterns+of+heme+oxygenase-1+transcription%5BTitle%5D)+AND+%22J+Perinatol%22%5BJournal%5D)">In vivo patterns of heme oxygenase-1 transcription.</a> J Perinatol. 21, Suppl 1. 119-1124 (2001).</li>
<li>Nielsen, A., Knoblauch, N. T., Dobos, G. J., Michalsen, A., Kaptchuk, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+Gua+Sha+treatment+on+the+microcirculation+of+surface+tissue%3A+a+pilot+study+in+healthy+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22Explore+%28NY%29%22%5BJournal%5D)">The effect of Gua Sha treatment on the microcirculation of surface tissue: a pilot study in healthy subjects.</a> Explore (NY). 3, 456-466 (2007).</li>
<li>Schwickert, M. E., Saha, F. J., Braun, M., Dobos, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gua+Sha+for+migraine+in+inpatient+withdrawal+therapy+of+headache+due+to+medication+overuse%5BTitle%5D)+AND+%22Forsch+Komplementmed%22%5BJournal%5D)">Gua Sha for migraine in inpatient withdrawal therapy of headache due to medication overuse.</a> Forsch Komplementmed. 14, 297-300 (2007).</li>
<li>Tsai, P. S., Lee, P. H., Wang, M. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Demographics%2C+training%2C+and+practice+patterns+of+practitioners+of+folk+medicine+in+Taiwan%3A+a+survey+of+the+Taipei+metropolitan+area%5BTitle%5D)+AND+%22J+Altern+Complement+Med%22%5BJournal%5D)">Demographics, training, and practice patterns of practitioners of folk medicine in Taiwan: a survey of the Taipei metropolitan area.</a> J Altern Complement Med. 14, 1243-1248 (2008).</li>
<li>Nielsen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gua+sha+research+and+the+language+of+integrative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bodyw+Mov+Ther%22%5BJournal%5D)">Gua sha research and the language of integrative medicine.</a> J Bodyw Mov Ther. 13, 63-72 (2009).</li>
<li>Contag, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+gene+expression+in+living+mammals+using+a+bioluminescent+reporter%5BTitle%5D)+AND+%22Photochem+Photobiol%22%5BJournal%5D)">Visualizing gene expression in living mammals using a bioluminescent reporter.</a> Photochem Photobiol. 66, 523-531 (1997).</li>
<li>Cui, K., Xu, X., Zhao, H., Wong, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quantitative+study+of+factors+affecting+in+vivo+bioluminescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Luminescence%22%5BJournal%5D)">A quantitative study of factors affecting in vivo bioluminescence imaging.</a> Luminescence. 23, 292-295 (2008).</li>
<li>Shibahara, S., Yoshida, T., Kikuchi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+increase+of+heme+oxygenase+activity+induced+by+hemin+in+cultured+pig+alveolar+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Biochem+Biophys%22%5BJournal%5D)">Mechanism of increase of heme oxygenase activity induced by hemin in cultured pig alveolar macrophages.</a> Arch Biochem Biophys. 197, 607-617 (1979).</li>
<li>Lee, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia-inducible+factor-1+mediates+transcriptional+activation+of+the+heme+oxygenase-1+gene+in+response+to+hypoxia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Hypoxia-inducible factor-1 mediates transcriptional activation of the heme oxygenase-1 gene in response to hypoxia.</a> J Biol Chem. 272, 5375-5381 (1997).</li>
<li>Maines, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+heme+oxygenase+system%3A+a+regulator+of+second+messenger+gases%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Pharmacol+Toxicol%22%5BJournal%5D)">The heme oxygenase system: a regulator of second messenger gases.</a> Annu Rev Pharmacol Toxicol. 37, 517-554 (1997).</li>
<li>Wunder, C., Potter, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+heme+oxygenase+system%3A+its+role+in+liver+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Drug+Targets+Cardiovasc+Haematol+Disord%22%5BJournal%5D)">The heme oxygenase system: its role in liver inflammation.</a> Curr Drug Targets Cardiovasc Haematol Disord. 3, 199-208 (2003).</li>
<li>Hoekstra, K. A., Godin, D. V., Cheng, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+role+of+heme+oxygenase+in+the+blood+vessel+wall+during+atherogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Protective role of heme oxygenase in the blood vessel wall during atherogenesis.</a> Biochem Cell Biol. 82, 351-359 (2004).</li>
<li>Yang, N. C., Lu, L. H., Kao, Y. H., Chau, L. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heme+oxygenase-1+attenuates+interleukin-1beta-induced+nitric+oxide+synthase+expression+in+vascular+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Sci%22%5BJournal%5D)">Heme oxygenase-1 attenuates interleukin-1beta-induced nitric oxide synthase expression in vascular smooth muscle cells.</a> J Biomed Sci. 11, 799-809 (2004).</li>
<li>Morse, D., Choi, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heme+oxygenase-1%3A+from+bench+to+bedside%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Heme oxygenase-1: from bench to bedside.</a> Am J Respir Crit Care Med. 172, 660-670 (2005).</li>
<li>Ryter, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+functions+of+heme+oxygenase-1+and+carbon+monoxide+in+the+respiratory+system%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxid+Redox+Signal%22%5BJournal%5D)">Protective functions of heme oxygenase-1 and carbon monoxide in the respiratory system.</a> Antioxid Redox Signal. 9, 2157-2173 (2007).</li>
<li>Wilson, K., Yu, J., Lee, A., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+and+in+vivo+bioluminescence+reporter+gene+imaging+of+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">In vitro and in vivo bioluminescence reporter gene imaging of human embryonic stem cells.</a> J Vis Exp. , (2008).</li>
<li>Calabrese, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitagenes%2C+dietary+antioxidants+and+neuroprotection+in+neurodegenerative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Biosci%22%5BJournal%5D)">Vitagenes, dietary antioxidants and neuroprotection in neurodegenerative diseases.</a> Front Biosci. 14, 376-397 (2009).</li>
<li>Contag, P. R., Olomu, I. N., Stevenson, D. K., Contag, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescent+indicators+in+living+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Bioluminescent indicators in living mammals.</a> Nat Med. 4, 245-247 (1998).</li>
</ol>

Autorzy nie zgłaszają żadnych konfliktów interesów.

Transkrypcja HO-1, indukowalnej formy hejmoooksygenazy, jest zwiększana przez wiele czynników, w tym hem, nadtlenek wodoru, promieniowanie UV, hipoksję oraz stresy fizyczne. Obrazowanie całego organizmu, takie jak opisany protokół bioluminescencji HO-1, pozwala na szybki wgląd w systemową ekspresję HO-1 w wielu narządach. U małych zwierząt obrazowanie bioluminescencyjne umożliwia wysokoczułą, ilościową, podłużną ocenę optyczną zmian w systemowej ekspresji genów w czasie rzeczywistym in-vivo, jak pokazano. Molekularne obr...

<table><tbody><tr><td>Lucyferyna</td><td>Caliper Life Sciences</td><td>P/N 122796</td><td>Wcześniej Xenogen</td></tr><tr><td>IVIS 100</td><td>Caliper Life Sciences</td><td></td><td>Wcześniej Xenogen</td></tr></tbody></table>

obrazowanie bioluminescencyjne nadekspresji hejmoooksygenazy-1 podczas procedury gua sha

Bioluminescence Imaging of Heme Oxygenase-1 Upregulation in the Gua Sha Procedure

Gua Sha to tradycyjna chińska terapia ludowa, w której stosuje się skrobanie skóry w celu wywołania podskórnego pozanaczyniowego wylewu krwi i siniaków. Protokół obrazowania optycznego bioluminescencyjnego HO-1-lucyferaza myszy transgeniczne opisane w niniejszym manuskrypcie zapewniają szybkiin vivoanaliza zwiększenia ekspresji genu syntazy tlenku hemu-1 (HO-1) w odpowiedzi na procedurę Gua Sha. Od dawna wiadomo, że HO-1 zapewnia cytoprotekcję przed stresem oksydacyjnym. Przyjmuje się, że zwiększenie ekspresji HO-1, oceniane na podstawie emisji bioluminescencji, reprezentuje odpowiedź przeciwutleniającą na krążące produkty hemoglobiny uwalniane podczas Gua Sha. Procedurę Gua Sha przeprowadzano poprzez powtarzalne pociągnięcia gładką krawędzią łyżki po nasmarowanej skórze pleców lub innej docelowej części ciała myszy transgenicznej, aż do zaobserwowania wybroczyn (krwotoków punktowych) lub sińców wskazujących na wynaczynienie krwi z naczyń włosowatych skóry. Po wykonaniu Gua Sha, sesje obrazowania bioluminescencyjnego przeprowadzano codziennie przez kilka dni, aby śledzić dynamikę ekspresji HO-1 w wielu narządach wewnętrznych.

Gua Sha, tradycyjne chińskie terapeutyczne skrobanie skóry, powoduje podskórne wynaczynienie krwi z mikrokrążenia. Przedstawiamy protokół obrazowania bioluminescencyjnego transgenicznych myszy HO-1-luciferase, aby wykazać, że Gua Sha zwiększa ekspresję hemooksygenazy-1 (HO-1) w wielu narządach.

Obrazowanie bioluminescencyjne nadekspresji hejmoooksygenazy-1 podczas procedury Gua Sha

Gua Sha to tradycyjna chińska terapia ludowa, która wykorzystuje skrobanie skóry w celu wywołania podskórnego pozanaczyniowego wylewu krwi i powstania siniaków. Protokół ...

Dzień dobry, nazywam się Jeffrey Young i pochodzę z oddziału neuroradiologii w Departamencie Radiologii w Brigham Women's Hospital, szpitalu klinicznym Harvard Medical School. Dzień dobry, nazywam się Brad Quo. Reprezentuję jednostkę gastroenterologiczną oraz Departament Medycyny, a także Centrum Radiologii Martino w Massachusetts General Hospital.Dzisiaj przedstawimy procedurę obrazowania bioluminescencyjnego regulacji hemooksygenazy 1 w żywym modelu mysim. W naszym laboratorium stosujemy tę technikę do badania systemowej nadregulacji hemooksygenazy 1 za pomocą procedury zwanej gua sha, tradycyjnej chińskiej metody medycznej polegającej na skrobaniu skóry.Zacznijmy zatem. Samice transgenicznych myszy HO1-lucyferazy są ważone przed znieczuleniem, aby później, przed rozpoczęciem usuwania sierści, można było obliczyć odpowiednią dawkę lucyferyny. Należy potwierdzić pełne znieczulenie myszy poprzez brak odruchu na uciśnięcie palca.Następnie za pomocą patyczka higienicznego nałóż lotion do usuwania włosów na grzbiet zwierzęcia. Odczekaj od 5 do 10 sekund, a następnie użyj czystego patyczka higienicznego, aby usunąć włosy. Po tym zabiegu namocz kawałek chusteczki w wodzie destylowanej i wytrzyj nią pozostałe włosy. W trakcie procedury kilka razy nanieś wodę destylowaną, aby nawilżyć obszary skóry poddawane gua.Delikatnie, lecz zdecydowanie, zeskrob sierść z pozbawionego owłosienia obszaru grzbietu myszy, używając plastikowej łyżki. Kontynuuj skrobanie do momentu, aż skóra na grzbiecie stanie się czerwona, co jest oznaką podskórnego wynaczynienia krwi. Zazwyczaj osiąga się to w ciągu dwóch do trzech minut.Umieść myszy w komorze indukcyjnej, przygotowując w tym czasie roztwór Lucifera, co zostanie omówione w następnej sekcji. Przygotuj roztwór Lucifera o stężeniu 7,5 mg/mL, rozpuszczając Lucifer w wodzie sterylnej. Dawka Lucifera wynosi 65,5 mg/kg masy ciała.Napełnij strzykawkę z igłą o rozmiarze 26 G pojedynczą alikwotą zawierającą pełną dawkę roztworu Lucifer. Szybko wbij igłę w jamę brzuszną myszy i podaj całą dawkę w jednym zastrzyku. Umieść kawałek niefluorescencyjnego czarnego papieru na platformie obrazowania stacji IVIS 100.Aby zredukować szum tła podczas obrazowania. Aby rozpocząć obrazowanie, przenieś mysz do komory obrazowania w stacji do obrazowania optycznego IVUS 100. Komora obrazowania jest stale przepływana 1,5% izofluranu, aby utrzymać mysz w narkozie; ułóż mysz w pozycji grzbietowej.Brzuch do góry. Ustaw akwizycję obrazu na średnim binningu, a czas ekspozycji na 30 sekund. Skonfiguruj urządzenie tak, aby powtarzało akwizycję obrazu co trzy minuty, w trybie ręcznym lub automatycznym.Rozpocznij akwizycję obrazów po uzyskaniu pierwszego zdjęcia. Wyznacz obszar zainteresowania (ROI), aby objął on obszary brzucha, klatki piersiowej i głowy. Następnie skopiuj ten ROI i wklej go do kolejnych obrazów.Przy użyciu oprogramowania do obrazowania żywych organizmów intensywność sygnału mierzy się w fotonach na sekundę. Należy zaznaczyć czas, po którym intensywność sygnału osiągnęła wartość szczytową, a następnie kontynuować obrazowanie myszy przez około 5 do 10 minut. Po osiągnięciu czasu szczytowego, gdy akwizycja obrazu w pozycji grzbietowej zostanie zakończona, należy odwrócić mysz i ułożyć ją w pozycji brzusznej.Cofnij się w czasie i wyznacz obszar ROI tak, aby obejmował plecy oraz obszar głowy. Po zarejestrowaniu pierwszego obrazu kontynuuj obrazowanie zwierzęcia przez 5 do 10 minut. Po zakończeniu akwizycji obrazów w pozycji brzusznej wyłącz izofluran.Przenieś mysz z komory obrazowania do komory indukcyjnej w celu wybudzenia. Do komory indukcyjnej podawane jest teraz wyłącznie powietrze medyczne; mysz powinna się obudzić w czasie krótszym niż jedna minuta.Zapisz dane obrazowania do późniejszej obróbki. Po wstępnym obrazowaniu przeprowadza się dodatkowe sesje obrazowania przez kilka dni po zabiegu gua. Przed obrazowaniem powtórz procedurę usuwania sierści z grzbietów myszy.Jeśli włosy odrosły in vivo, obserwuje się zwiększoną ekspresję HO1 w odpowiedzi na gu sha. Widok z przodu tej samej myszy przedstawiono odpowiednio od lewej do prawej: przed gu sha, w 18. godzinie, 36. godzinie oraz 120. godzinie po zabiegu gu sha. Jak widać, intensywność sygnału bioluminescencji w wielu narządach stopniowo wzrasta po zastosowaniu gu sha.Wykres ten przedstawia ilościową zmianę czasową w ciągu 120 godzin strumienia optycznego z całego ciała tej samej myszy. W odpowiedzi na procedurę guha. Właśnie zapoznali się Państwo z tym, jak obrazować in vivo nadekspresję oksygenazy hemowej 1 za pomocą obrazowania bioluminescencyjnego. Podczas wykonywania tej procedury ważne jest, aby obszar poddawany obrazowaniu pozostawał czysty, aby uniknąć zakłóceń spowodowanych przez kurz i sierść.Konieczna jest staranna kontrola czasu ekspozycji, aby uniknąć nasycenia w wynikach obrazowania. To wszystko.Dziękujemy bardzo za oglądanie i życzymy powodzenia w przeprowadzaniu eksperymentów.

bioluminescence-imaging-heme-oxygenase-1-upregulation-gua-sha

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Bioluminescencyjne obrazowanie zwiększonej ekspresji hemoksygenazy-1 w procedurze Gua Sha

Obrazowanie bioluminescencyjne aktywności czynnika indukowanego hipoksją-1α jest stosowane do monitorowania rozwoju hipoksji guza wewnątrzczaszkowego w mysim modelu przerzutów raka piersi do mózgu.

In vivo obrazowanie bioluminescencyjne dynamiki niedotlenienia guza w przerzutach raka piersi do mózgu w modelu mysim

Oksydaza NADPH jest głównym źródłem reaktywnych form tlenu (ROS) w fagocytach. Ze względu na efemeryczną naturę ROS, pomiar i monitorowanie poziomu ROS u żywych zwierząt jest trudne. Opisano mało inwazyjną metodę seryjnego oznaczania ilościowego ROS u żywych myszy.

Obrazowanie bioluminescencyjne aktywnościy oksydazy NADPH w różnych modelach zwierzęcych

Niniejszy artykuł opisuje podawanie myszom bakterii z markerem lux oraz późniejszą analizę in vivo z wykorzystaniem obrazowania bioluminescencyjnego IVIS.

Obrazowanie bakterii bioluminescencyjnych In vivo

Source: Hunt, A. M. A., et al. Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model. J. Vis. Exp.(2017).This video demonstrates the procedure for assessing infection clearance and healing progression in a wounded diabetic mouse using bioluminescent and microscopic images.

Bioluminescence Imaging to Track Bacterial Infection and Wound Healing in a Mouse Model

Opisujemy nieinwazyjną metodę obrazowania do rozróżniania etapów zapalnych. Ogólnoustrojowe dostarczanie luminolu ujawnia obszary ostrego stanu zapalnego zależne od aktywności MPO w neutrofilach. Natomiast wstrzyknięcie lucygeniny pozwala na wizualizację przewlekłego stanu zapalnego zależnego od aktywności Phox w makrofagach.

In vivo (in vivo) Metoda obrazowania w celu rozróżnienia ostrego i przewlekłego stanu zapalnego

Ten manuskrypt opisuje użycie genetycznie kodowanych reporterów fluorogenicznych w zastosowaniu obrazowania żywych komórek do badania stresu oksydacyjnego wywołanego ksenobiotykami. To eksperymentalne podejście oferuje niezrównaną rozdzielczość czasoprzestrzenną, czułość i swoistość, unikając jednocześnie wielu niedociągnięć konwencjonalnych metod stosowanych do wykrywania toksykologicznego stresu oksydacyjnego.

Obrazowe podejścia do oceny toksykologicznego stresu oksydacyjnego przy użyciu genetycznie kodowanych czujników fluorogennych

Ten protokół opisuje stworzenie mysiego modelu z guzem do monitorowania progresji guza i angiogenezy w czasie rzeczywistym za pomocą podwójnego obrazowania bioluminescencyjnego.

Podwójne obrazowanie bioluminescencyjne progresji guza i angiogenezy

Celem tego protokołu jest wywołanie przejściowej produkcji in vivo nieśmiertelnych poziomów reaktywnych form tlenu (ROS) w skórze myszy, co dodatkowo promuje reakcje fizjologiczne w tkance.

Stymulacja nisz komórek macierzystych i regeneracji tkanek w skórze myszy za pomocą przełączanej fotogeneracji reaktywnych form tlenu in situ zależnej od protoporfiryny IX

Bioluminescencja - światło emitowane przez enzym lucyferazy utleniający substrat o małych cząsteczkach, lucyferynę - może być wykorzystane do aktywacji białek fotosensorycznych, dodając w ten sposób kolejny wymiar do stymulacji świetlnej i umożliwiając manipulowanie wieloma funkcjami zależnymi od światła w komórkach w skalach czasowych i przestrzennych.

Optogenetyka bioluminescencyjna 2.0: wykorzystanie bioluminescencji do aktywacji białek fotosensorycznych in vitro i in vivo

Prezentujemy protokół do bezpośredniej wizualizacji aktywności metabolicznej w komórkach regulowanych przez aminokwasy za pomocą mikroskopii stymulowanego rozpraszania Ramana (DO-SRS) z tlenkiem deuteru (ciężka wodaD2O), która jest zintegrowana z mikroskopią fluorescencyjną wzbudzenia dwufotonowego (2PEF).

Bioortogonalne obrazowanie chemiczne metabolizmu komórkowego regulowanego przez aminokwasy aromatyczne

Ten protokół opisuje standaryzowaną, krokową procedurę wykonywania Gua Sha miedzianym kamieniem Bian w osób z rozpoznaniem przewlekłego zespołu zmęczenia. Technika polega na zastosowaniu zgrzebła ze stopu miedzi do określonych ścieżek połączeń (Naczynia Rządzącego i Połączenia Mięśnia Pęcherza) oraz określonych punktów akupunkturowych. Dołączono reprezentatywne dane obserwacyjne przed i po interwencji, aby zilustrować przepływ procedury i metody zbierania danych.

Zstandardyzowany protokół stosowania miedzianeego kamienia Bian w technice Gua Sha w leczeniu przewlekłego zmęczenia u osób zdrowych

Poznaj obrazowanie bioluminescencyjne regulacji oksygenazy hemowej-1 w myszach po zabiegu Gua Sha. Ta metoda pozwala monitorować ekspresję HO-1 w wielu narządach w czasie rzeczywistym.

Obrazowanie bioluminescencyjne nadekspresji hejmoooksygenazy-1 podczas procedury Gua Sha

Przeglądaj więcej filmów