Name: Hodowla prekursorów mysich neuronalnych komórek macierzystych (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00.000+00:00
Duration: 27 min 44 s
Description: Naucz się izolować prekursory neuronalne z kory mózgowej myszy embrionalnych. Ta metoda obejmuje wyłuskiwanie tkanek, trawienie enzymatyczne i hodowlę komórek na lamininie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol>
<li>Mysie prekursory neuronalne (NPCs) wyizolowano z kory zarodka w stadium E12.5.</li>
<li>Warstwy skóry oraz mezenchymy usunięto z wypreparowanych pęcherzyków mózgowia przedniego.</li>
<li>Pęcherzyki inkubowano przez 20 minut w temperaturze 37°C w 0,05% trypsynie z 0,02% EDTA i 0,2% BSA w HBSS.</li>
<li>Trypsynizację przerwano, dodając równą objętość 1 mg/ml inhibitora trypsyny sojowej (Sigma #T6522) w HBSS.</li>
<li>Trawione tkanki rozdzielono za pomocą kilku cykli trituracji przy użyciu wypalanych pipet Pasteura.</li>
<li>Komórki przemyto raz w 0,2% BSA w HBSS i wysiano w zagęszczeniu 50 000 cells/ml na pokrywki szkiełkowe pokryte lamininą w pożywce zawierającej 20 ng/ml EGF, 10 ng/ml FGF2 (R&amp;D Systems lub Peprotech) oraz 2 ug/ml heparyny (Sigma).</li>
</ol>

<ol><li>Currle, D., Cheng, X., Hsu, C., Monuki, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+and+indirect+roles+of+CNS+dorsal+midline+cells+in+choroid+plexus+epithelial+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Direct and indirect roles of CNS dorsal midline cells in choroid plexus epithelial formation.</a> Development. 132 (15), 3549-3559 (2005).</li>
<li>Flanagan, L., Rebaza, L., Derzic, S., Schwartz, P., Monuki, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+human+neural+precursor+cells+by+laminin+and+integrins%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins.</a> J Neurosci Res. 83, 845-856 (2006).</li>
</ol>

Znaczące postępy w rozumieniu rozwoju OUN oraz biologii komórek macierzystych stały się możliwe dzięki zdolności do pozyskiwania, izolowania i hodowli embrionalnych neuralnych komórek macierzystych. Niniejszy film prezentuje sekcję kory mózgowej myszy w stadium E12.5, a następnie dysagregację i hodowlę embrionalnych neuralnych komórek macierzystych. Wiele innych podobnych metod zostało z powodzeniem zastosowanych przez innych badaczy.

<table><tbody><tr><td>Proste nożyczki irydologiczne</td><td>Narzędzie</td><td>Fine Science Tools</td><td>14060-11</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki średnie</td><td>Narzędzie</td><td>Fine Science Tools</td><td>15024-10</td><td></td></tr><tr><td>Mikronożyczki</td><td>Narzędzie</td><td>Fine Science Tools</td><td>15002-08</td><td></td></tr><tr><td>Pinceta zakrzywiona</td><td>Narzędzie</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-35</td><td></td></tr></tbody></table>

hodowla prekursorów neuronalnych komórek macierzystych myszy

Culture of Mouse Neural Stem Cell Precursors

Pierwotne hodowle neuralnych komórek macierzystych są przydatne w badaniu mechanizmów leżących u podstaw rozwoju ośrodkowego układu nerwowego. Badania nad komórkami macierzystymi zwiększą naszą wiedzę na temat układu nerwowego i mogą pozwolić na opracowanie metod leczenia obecnie nieuleczalnych chorób i urazów mózgu. Ponadto komórki macierzyste powinny być wykorzystywane w badaniach ukierunkowanych na szczegółową analizę mechanizmów różnicowania i transróżnicowania neuralnego oraz sygnałów genetycznych i środowiskowych, które kierują specjalizacją komórek w konkretne typy komórkowe. Niniejszy film prezentuje technikę stosowaną do dysagregacji komórek z grzbietowej części przedmózgowia myszy w 12,5 dniu embrionalnym. Procedura sekcji obejmuje pobranie embrionów myszy E12.5 z macicy, usunięcie „skóry” za pomocą precyzyjnej pęsety i wreszcie wyizolowanie fragmentów kory mózgowej. Po sekcji tkanka zostaje poddana trawieniu i dysocjacji mechanicznej. Resuspensowane, zdysocjowane komórki są następnie hodowane w pożywce do „komórek macierzystych”, która sprzyja wzrostowi neuralnych komórek macierzystych.

W tym filmie opisano metodę izolacji neuroprekursorów z rozwijającej się kory zarodków myszy. Przedstawiono procedurę usuwania zarodków z macicy, wycinania tkanki korowej oraz trawienia wyizolowanej kory mózgu.

Hodowla prekursorów neuronalnych komórek macierzystych myszy

Podstawowe hodowle neuralnych komórek macierzystych są użyteczne w badaniu mechanizmów leżących u podstaw rozwoju ośrodkowego układu nerwowego. Badania nad komórkami macierzystymi przyczynią się do zwiększenia...

Jest to pierwszy krok w procesie izolacji, dysocjacji i hodowli prekursorowych komórek neuronalnych. Najpierw powlekam płytkę 24-dołkową. Nie jest ona przeznaczona do hodowli tkankowej.Pokryję to lamininą, aby komórki mogły przylgnąć. Najpierw pokryję powierzchnię mieszaniną wody i poli-D-lizyny. Dodam około 450 µL na dołek.Więc teraz, pokryłem połowę płytki, te dwa rzędy tutaj, roztworem poli-D-lizyny. Będę inkubować przez pięć minut w temperaturze pokojowej, tutaj w dygestorium. Minęło pięć minut inkubacji.Usunę teraz roztwór PDL za pomocą odsysacza. Standardowy odsysacz laboratoryjny. Teraz ponownie wypłuczę dołki wodą, około 450 µL.Rzeczywiście, płukanie wodą nie wymaga inkubacji. Przystępuję zatem do odessania wody. Teraz dodam roztwór laminujący.Lamininę rozpuszczono w pożywce EM EM w stężeniu 2 µg/mL. Do każdej studzienki dodam teraz 450 µL roztworu lamininy; w tej chwili używam plastiku, ale w studzienkach można było również zastosować szkiełka podstawowe.Komórki będą inkubowane w temperaturze 37°C w inkubatorze do hodowli tkankowych przez co najmniej cztery godziny. Posiadam dwie pęsety precyzyjne zgięte pod kątem 45 stopni oraz nożyczki precyzyjne, również zgięte pod kąte

culture-of-mouse-neural-stem-cell-precursors

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Kultura prekursorów ludzkich komórek macierzystych mózgu

W niniejszej pracy przedstawiamy metodę izolacji mysich komórek macierzystych grzebienia neuronalnego naskórka (EPI-NCSC). Technika ta polega na mikrodysekcji mieszków włosów wibrysów, izolacji wybrzuszenia (bulge) i umieszczeniu go w hodowli tkankowej. EPI-NCSC zaczynają emigrować z eksplantów wybrzuszenia na podłoże w ciągu 3 - 4 dni.

Hodowle mysich macierzystych komórek grzebienia neuronalnego naskórka (EPI-NCSC)

Niniejszy protokół wideo demonstruje zastosowanie testu neurosfer do izolacji i ekspansji komórek macierzystych mózgu z eminencji zwojowych mózgu myszy w 14. dniu embrionalnym.

Ustanowienie hodowli embrionalnych neuralnych komórek macierzystych myszy z wykorzystaniem testu neurosferowego

Izolacja embrionalnej grzebieni neuralnej z rurki neuralnej umożliwia zastosowanie metod in vitro do badania migracji, samoodnawiania oraz multipotencji grzebieni neuralnej.

Izolacja i hodowla komórek grzebienia neuronalnego z zarodkowej rurki nerwowej myszy

Ten film demonstruje szczegółowy protokół izolowania ścian bocznych komór od mózgu dorosłej myszy i przeprowadzania enzymatycznej dysocjacji tkanek w celu uzyskania pojedynczych komórek. Komórki te są następnie poddawane specyficznym warunkom hodowli, które selektywnie zwiększają proliferację nerwowych komórek macierzystych i promują ich różnicowanie w kokultury oligodendrocytów i astrocytów.

Uzyskiwanie mieszanej kultury oligodendrocytów i astrocytów z dorosłych komórek macierzystych nerwowych myszy

Ten film demonstruje metodę generowania in vitro nerwowych komórek progenitorowych (NPC) z embrionalnych komórek macierzystych myszy (mESC). MESC są hodowane w zawiesinie w celu wytworzenia ciał embrionalnych (EB), które są następnie kierowane do różnicowania się w NPC poprzez traktowanie kwasem retinowym w kulturze adherentnej.

Technika generowania nerwowych komórek progenitorowych z embrionalnych komórek macierzystych myszy

Tutaj opisujemy szczegółowy protokół jednoczesnego generowania kultur neuronalnych komórek prekursorowych, jako przylegających monowarstw lub neurosfer, ze strefy podkomorowej i zakrętu zębatego poszczególnych dorosłych myszy.

Jedna mysz, dwie kultury: izolacja i hodowla dorosłych nerwowych komórek macierzystych z dwóch stref neurogennych poszczególnych myszy

Ten protokół szczegółowo opisuje metodę generowania neuronalnych komórek progenitorowych z embrionalnych komórek macierzystych przy użyciu metody monowarstwowej bez surowicy. Te progenitory mogą być wykorzystywane do uzyskiwania dojrzałych typów komórek nerwowych lub do badania procesu specyfikacji neuronalnej i są podatne na skalowanie w formacie wielodołkowym w celu przeprowadzenia badań przesiewowych związków.

Różnicowanie neuronalne embrionalnych komórek macierzystych myszy w hodowli jednowarstwowej bez surowicy

Ustanowienie systemów hodowli do ekspansji dorosłych nerwowych komórek macierzystych (aNSC) pozwala na badanie i zastosowanie aNSC w terapii. Strefa podmodzelowa (SCZ) została niedawno uznana za nowy region tworzący neuroblasty u dorosłych myszy. W tym miejscu opisano metody izolacji, ekspansji i różnicowania SCZ-aNSC.

Izolacja i hodowla dorosłych nerwowych komórek macierzystych ze strefy podmodzelowej myszy

Tutaj wprowadzamy nowatorską technikę mikrochirurgiczną do izolacji nerwowych komórek macierzystych z wyniosłości zwojowej zarodka myszy E13.

Izolacja i hodowla embrionalnych mysich nerwowych komórek macierzystych

Opisujemy procedurę różnicowania in vitro embrionalnych komórek macierzystych myszy w komórki neuronalne za pomocą metody wiszącej kropli. Ponadto przeprowadzamy kompleksową analizę fenotypową za pomocą RT-qPCR, immunofluorescencji, sekwencjonowania RNA i cytometrii przepływowej.

Różnicowanie i charakterystyka neuronalnych progenitorów i neuronów z embrionalnych komórek macierzystych myszy

Naucz się izolować prekursory neuronalne z kory mózgowej myszy embrionalnych. Ta metoda obejmuje wyłuskiwanie tkanek, trawienie enzymatyczne i hodowlę komórek na lamininie.

Hodowla prekursorów neuronalnych komórek macierzystych myszy

Przeglądaj więcej filmów