Synchronizacja nicieni: metoda uzyskiwania populacji robaków w identycznych stadiach rozwoju

0 wyświetleń3:43 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

-Zacznij od umieszczenia samozapładniających się robaków w ostatnim stadium larwalnym na talerzach obsianych bakteryjnym źródłem pokarmu. Pozwól larwom rozwinąć się w dojrzałe dorosłe osobniki, aż będzie obfitość jaj w robakach i złożonych na talerzach. Umyj talerze buforem, aby zebrać jaja i robaki.

Następnie zastąp bufor roztworem wybielacza, który rozpuszcza dorosłe robaki. Chronione przez skorupkę jaja zarodki przetrwają to leczenie, chociaż będą na różnych etapach rozwoju. Następnie zastąp wybielacz buforem i pozwól zarodkom się rozwinąć. Ponieważ larwy wykluwają się ze skorupek jaj przy braku pożywienia, rozwój zostanie zatrzymany na pierwszym etapie larwalnym.

Przenieś larwy na talerze z jedzeniem, aby wznowić rozwój. Będzie to stymulować synchroniczną progresję przez pozostałe stadia larwalne.

Kiedy robaki osiągną ostatnie stadium larwalne, przenieś je na talerze z jedzeniem i FUdR, inhibitorem syntezy DNA, który zapobiega produkcji potomstwa. Ciągły rozwój w obecności FUdR prowadzi do powstania populacji bezpłodnych dorosłych robaków. W tym eksperymencie zsynchronizujemy populację nicienia C. elegans.

-Na początek przenieś larwy L4 o pożądanym tle genetycznym na świeżo zasiany trawnik Escherichia coli na pożywce wzrostowej nicieni lub płytkach NGM. Użyj co najmniej dwóch płytek 100 milimetrów lub trzech 60 milimetrów dla każdego szczepu.

Wysiadywać robaki w odpowiedniej temperaturze wzrostu przez trzy do czterech dni lub do momentu, gdy płytki zostaną zagęszczone dużą liczbą jaj i robaków grawitacyjnych. Zmyj jaja i robaki z płytek, używając około sześciu mililitrów buforu M9 na 100 milimetrową płytkę nicieni. Za pomocą szklanych pipet Pasteura przenieś jaja i robaki do indywidualnych 15-mililitrowych probówek wirówkowych dla każdego szczepu. Obracaj te probówki przez trzy minuty przy 6,180 g.

Po odwirowaniu odessać bufor M9, pozostawiając tylko zwierzę i osad jajowy. Dodaj trzy do czterech mililitrów roztworu wybielacza do każdej probówki i z przerwami wiruj przez sześć minut.

Następnie dodaj bufor M9, aby napełnić każdą probówkę i wirować z prędkością 6 180 g przez jedną minutę. Odessać supernatant i powtórzyć to płukanie M9 trzy razy.

Po umyciu przenieś granulki jaj do świeżej 15-mililitrowej probówki zawierającej około dziewięciu mililitrów buforu M9. Zsynchronizuj świeżo wyklute robaki, nutując w temperaturze 20 stopni Celsjusza przez 16 do 48 godzin.

Po odwirowaniu tych rurek o wadze 6,180 g przez 1,5 minuty, połóż zsynchronizowane zwierzęta L1 na świeżo wysianym trawniku OP50 na indywidualnych płytkach NGM. Utrzymuj płytki w temperaturze 20 stopni Celsjusza, aż zwierzęta osiągną stadium larwalne L4 po około 42 godzinach. W tym momencie użyj platynowego kilofa, aby przenieść larwy L4 na płytki NGM z nasionami OP50 zawierające 0,5 miligrama na mililitr FUdR, aby zapobiec wytwarzaniu potomstwa.

09:10

Metoda hodowli embrionalnych komórek C. elegans

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:13

Metody oceny subkomórkowych kompartmentów mięśniowych u C. elegans

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

08:12

Pomiar wpływu substancji chemicznych na wzrost i rozmnażanie Caenorhabditis elegans

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

11:34

Podstawowe metody Caenorhabditis elegans: synchronizacja i obserwacja

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:46

Nowe wskaźniki charakteryzujące wydłużenie embrionalne nicieni Caenorhabditis elegans

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

11:58

Metoda zestawu replik: wysokoprzepustowe podejście do ilościowego pomiaru długości życia Caenorhabditis elegans

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:36

Pomiary fizjologicznych reakcji na stres u C. elegans

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

06:55

Wykorzystanie Caenorhabditis elegans do badań przesiewowych pod kątem interakcji opiekuńczych specyficznych dla tkanek

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

08:51

Kultura i analiza populacji dużoskalowych o mieszanym stadium Caenorhabditis elegans

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

08:57

Mikrodysekcja laserowa do zastosowań jednotkankowych niezależnych od gatunku

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

Ostatnia aktualizacja: 15 sierpnia 2026