JoVE Encyclopedia of Experiments
Biologia
0 wyświetleń • 2:53 min • April 30th, 2023
-Aby uzyskać dostęp do rozwijającej się poczwarki, należy usunąć poczwarkę po oddzieleniu się nabłonka poczwarki od naskórka lub po stadium poczwarki P5. Na początek umieść nienaruszoną poczwarkę brzuszną stroną skierowaną do siebie. Użyj kleszczy, aby przytrzymać poczwarkę w pustej przestrzeni między przednim końcem osłonki a głową poczwarki. Następnie delikatnie rozbij i usuń przednią część poczwarki, aby odsłonić głowę.
Zachowując orientację brzuszną, użyj kleszczy, aby utworzyć małe przerwy wzdłuż przedniej i tylnej osi poczwarki i upewnić się, że w tym procesie powstaje ciągła przerwa. Uważaj, aby nie uszkodzić żadnej tkanki poczwarki znajdującej się bezpośrednio pod spodem. Następnie kontynuuj rozbijanie poczwarki od szczeliny na zewnątrz, po jednej porcji na raz, i rozłóż przy tym rozdartą osłonkę. Za pomocą cienkiego, mokrego pędzla podnieś odsłoniętą poczwarkę do dalszych badań. W przykładowym protokole zobaczymy, jak usunąć poczwarkę Drosophila guttifera i przygotować poczwarkę do obrazowania.
-Aby rozpocząć usuwanie puparium, przyklej kawałek taśmy dwustronnej na kawałku ręcznika papierowego. Umieść poczwarkę na taśmie dwustronnej, brzuszną stroną do góry. Zlokalizuj przestrzeń między przednią stroną poczwarki a poczwarką wewnętrzną. Chwyć i usuń poczwarkę wokół tej szczeliny za pomocą kleszczy i odsłoń przednią stronę głowy poczwarki.
Włóż końcówkę kleszczy, przesuwając ją równolegle do osi przednio-tylnej. Podnieś końcówkę kleszczy, aby miejscowo złamać poczwarkę. Powtarzaj tę czynność, aż pęknięcie dotrze do tylnej części poczwarki. Upewnij się, że między poczwarką a nogami poczwarki utworzyła się szczelina i przełam brzuszną stronę poczwarki, minimalizując uszkodzenie poczwarki wewnętrznej. Po jak największym rozbiciu poczwarki wyjmij poczwarkę za pomocą cienkiego pędzla. Umieść poczwarkę na kawałku bibuły, który został zwilżony ddH2O i umieszczony na plastikowej szalce Petriego. Natychmiast rób zdjęcia, ponieważ odsłonięta poczwarka jest wrażliwa i łatwo wysycha.