Elektrokardiografia danio pręgowanego (EKG): minimalnie inwazyjny test do oceny czynności serca

- Na początek umieść znieczuloną rybę brzuszną stroną do góry w szczelinie w mokrej gąbce. Włóż elektrodę dodatnią do linii środkowej ryby na poziomie bulwiastej arteriozy. Następnie umieść elektrodę ujemną poniżej komory i 0,5 do 1 milimetra na lewo od linii środkowej, aby utworzyć dwubiegunowy przewód, w poprzek którego można zmierzyć różnice w potencjale elektrycznym. Na koniec włóż elektrodę odniesienia w pobliże okolicy odbytu, aby uziemić sygnał elektryczny.

Rozpocznij nagrywanie, a po krótkim czasie przejrzyj ślad, aby upewnić się, że spełnione są cztery kryteria. Wszystkie formy fal muszą być widoczne i odróżniać się od siebie. Załamek P, który reprezentuje depolaryzację przedsionków, musi być dodatni. Suma netto fal Q, R i S, która reprezentuje depolaryzację komorową, musi być dodatnia. I wreszcie, załamek T, który reprezentuje repolaryzację przedsionków, musi być dodatni. Jeśli kryteria nie są spełnione, wyreguluj elektrody, aż zostanie zarejestrowana właściwa ścieżka.

Po nagraniu obudź rybę, zanurzając ją w natlenionej wodzie i spryskując skrzela wodą, aż skrzela lub ryba zaczną się regularnie poruszać. W tym przykładzie wykonamy elektrokardiografię powierzchniową na dorosłym danio pręgowanym.

- W dniu eksperymentu przetransportuj danio pręgowanego z akwarium do laboratorium. Aby skonfigurować system rejestracji EKG in vivo, podłącz niezbędne elementy wyposażenia i włóż trzy oznaczone kolorami elektrody ze stali nierdzewnej przewodu EKG do trzech dopasowanych kolorystycznie portali dostępowych wzmacniacza. W celu indukcji znieczulenia na poziomie 4 należy zanurzyć dorosłego danio pręgowanego w naczyniu zawierającym roztwór środków znieczulających o najniższych z góry określonych stężeniach zatwierdzonych przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki nad Zwierzętami i Ich Wykorzystywania.

Gdy danio pręgowany utrzyma poziom znieczulenia przez trzy sekundy, użyj pary kleszczy, aby natychmiast przenieść rybę na wilgotną gąbkę ze szczeliną brzuszną do góry w celu umieszczenia trzech elektrod EKG. Delikatnie włóż elektrodę dodatnią w brzuszną linię środkową na poziomie bulwiastej tętnicy 1 do 2 milimetrów powyżej wyimaginowanej linii łączącej dwie dolne krawędzie wieczków.

Umieść elektrodę ujemną doogonowo i 0,5 do 1 milimetra w lewo bocznie do elektrody dodatniej w odległości większej niż maksymalna długość wierzchołkowo-podstawowa dorosłej komory danio pręgowanego. Następnie umieść elektrodę odniesienia doogonowo w pobliżu okolicy odbytu. W celu rejestracji EKG uruchom system i otwórz program do akwizycji danych EKG. Wybierz żądane ustawienie z menu rozwijanych dla zakresu, dolnoprzepustowego i górnoprzepustowego.

Naciśnij Start, aby rozpocząć ciągły zapis EKG bez przerw z częstotliwością próbkowania 1 kiloherca. Aby zoptymalizować pozycjonowanie przewodów w celu uzyskania maksymalnego stosunku sygnału do szumu, naciśnij stop, aby zatrzymać nagrywanie i przejrzyj ślad wkrótce po pierwszej próbie nagrania dla każdego serca. Jeśli oczekuje się, że EKG będzie normalne, upewnij się, że wszystkie formy fal EKG są wyraźne i łatwo widoczne oraz że załamek P, zespół QRS netto i załamek T są dodatnie.

- Najważniejszym krokiem jest pozycjonowanie przewodów, aby zmaksymalizować stosunek sygnału do szumu. Zastosuj wszystkie cztery kryteria walidacyjne po pierwszej próbie rejestracji EKG dla każdej ryby, aby uzyskać prawidłowe informacje zwrotne.

- Jeśli spodziewane jest prawidłowe EKG, w razie potrzeby zmień położenie elektrod, aż zostaną spełnione wszystkie te cztery kryteria walidacyjne. Jeśli spodziewany jest normalny załamek T, ale załamek T jest zbyt mały, zmień położenie elektrod, aby zmaksymalizować amplitudę fali T. Wznów zapis EKG po zoptymalizowaniu położenia elektrody, zapisując przebiegi EKG do późniejszej analizy.

Pod koniec sesji zapisu EKG ostrożnie wyjmij elektrody, nie raniąc ryby. W badaniach nad przeżywalnością należy przenieść ryby do świeżej, natlenionej wody dla ryb wolnej od tricainy. Należy pamiętać, że w tym filmie, aby ułatwić czytelnikom oglądanie rekonwalescencji ryb po znieczuleniu, natlenianie jest przerwane.

Aby ułatwić powrót do zdrowia po znieczuleniu w badaniach nad przeżyciem, użyj pipety Pasteura, aby energicznie spryskać skrzela wodą, aż ryba wznowi regularne ruchy skrzeli lub pływanie. Następnie monitoruj ryby, aby w pełni wyzdrowieć ze znieczulenia przed powrotem ryb do akwarium. Rybę uważa się za w pełni wyleczoną ze znieczulenia, gdy może pływać w pozycji pionowej przez co najmniej 5 sekund.