JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 3:12 min. • April 30th, 2023
- Aby rozpocząć sekcję, użyj jednej pary kleszczy, aby chwycić ciało larwy w środku, a drugiej pary, aby rozerwać larwę na pół. Następnie ściśnij haczyk do ust na przednim końcu, trzymając ciało po tylnej stronie. Następnie wepchnij kleszcze trzymające usta do wnętrza ciała. Użyj tylnych kleszczy, aby złożyć ścianę ciała na lewą stronę.
W tym preparacie gruczoły ślinowe i jelita można łatwo zidentyfikować i usunąć, aby odsłonić mózg i wyimaginowane dyski. Widać antenę, oko, nogę, skrzydło i przezmianki. Po utrwaleniu przenieść preparat larwalny na szkiełko z podłożem montażowym, gdzie krążki mogą być dalej preparowane. W przykładowym protokole zobaczymy, jak wypreparować wyimaginowane dyski skrzydeł za pomocą tego preparatu larwalnego.
- Na początek użyj drewnianego patyczka lub kleszczy, aby przenieść wędrujące larwy trzeciego stadium rozwojowego na szalkę Petriego z PBS. Następnie genotypuj je w świetle fluorescencyjnym, aby zidentyfikować odpowiednie markery fluorescencyjne dla larw mozaiki. Przed kontynuowaniem umyj larwy PBS. Następnie pod mikroskopem preparacyjnym użyj dwóch par kleszczy, aby uszczypnąć środek larwy i rozerwać ciało na pół. Następnie ściśnij haczyki do ust, jednocześnie popychając usta w kierunku ciała, aby odwrócić ciało na lewą stronę. Następnie usuń zbędne materiały, takie jak gruczoły ślinowe i ciała tłuszczowe. Larwy są teraz przygotowane do utrwalenia i barwienia przeciwciałami, co jest szczegółowo opisane w protokole tekstowym.
Przenieś barwione preparaty tkankowe na szkiełko mikroskopowe za pomocą dwumililitrowej plastikowej pipety transferowej. Następnie za pomocą kleszczy przenieś pojedyncze larwy do kropli podłoża montażowego na szkiełku mikroskopowym. Teraz za pomocą kleszczy wyizoluj wyimaginowane dyski. Zacznij od przytrzymania końca wypreparowanej tkanki i odciągnięcia krążków czułkowych mózgu i oka za pomocą innych kleszczy. Utrzymuj mózgi w gotowości do użycia.
Teraz zlokalizuj wyimaginowane dyski skrzydeł. Dyski imaginalne skrzydeł są przyklejone do bocznej strony wypreparowanej tkanki. Następnie zabezpiecz tkankę jednym kleszkiem i delikatnie zdrap krążki skrzydeł. Następnie umieść mózgi w pobliżu dysków skrzydeł, aby chronić je przed zmiażdżeniem przez szkiełko nakrywkowe. Teraz delikatnie przykryj struktury szkiełkiem nakrywkowym i uszczelnij szkiełko nakrywkowe lakierem do paznokci. Przechowuj szkiełko w temperaturze 4 stopni Celsjusza.