Drosophila Rozwarstwienie męskiego gruczołu dodatkowego: metoda izolowania komórek wtórnych

- Pod mikroskopem preparacyjnym i w pożywkach z surowicą uzupełnioną usuńmy układ rozrodczy z każdej muchy za pomocą kleszczy. Najpierw usuń części przewodu pokarmowego, które mogły towarzyszyć układowi rozrodczemu. Aby odizolować gruczoły dodatkowe i przewód ejakulacyjny, usuń jądra, bańkę wytryskową i terminale. Myj chusteczkę przez jedną do dwóch minut w PBS, aby usunąć surowicę. Następnie przenieś go do roztworu dysocjacyjnego.

Aby wystawić komórki wewnątrz gruczołów na działanie roztworu dysocjacyjnego, przytrzymaj środek każdego gruczołu kleszczami i przetnij gruczoł parą ostrych kleszczyków. Usuń proksymalną część gruczołu i przewód wytryskowy, aby pozostawić dystalny koniec gruczołów zawierających rzadką populację komórek wtórnych odpowiedzialnych za wydzielanie białek biorących udział w kojarzeniu. Na koniec przenieś końcówki dławika pomocniczego do probówki z mikrowirówką, przygotowując się do trawienia. W poniższym protokole przeanalizujemy gruczoły pomocnicze, aby wyizolować komórki wtórne do analizy transkryptomu.

- Przed rozpoczęciem zabiegu przeciąć i wypalić okrągłe, szerokie końcówki o pojemności 200 mikrolitrów do obsługi gruczołów i przeciągnąć otwór końcówki wie