JoVE Encyclopedia of Experiments
Biologia
0 wyświetleń • 3:28 min • April 30th, 2023
- Zacznij od wspólnego zakwaterowania określonej liczby samców i samic muszek owocowych Drosophila melanogaster w fiolce zawierającej podłoże z mąki kukurydzianej. Pozwala to na stałe zagęszczenie potomstwa.
Pozwól samicom much złożyć jaja. Następnie usuń dorosłe muchy. Jaja staną się larwami, poczwarkami, a w końcu dorosłymi muchami w ciągu 10 dni. Nowe muchy pojawiające się wcześniej niż ich kohorta powinny zostać usunięte przed 9 dniem. Podziel teraz zsynchronizowane muchy na grupy dla warunków kontrolnych i eksperymentalnych. Cohousing samców i samic much umożliwia krycie, usuwając zmienną, która wpływa na długość życia.
Po kilku dniach podziel muchy według płci na grupy. Umieść równą liczbę much w odpowiednich warunkach doświadczalnych. Co trzy dni przenieś żywe muchy do nowej fiolki i zapisz liczbę martwych much. Powtarzaj ten proces, aż wszystkie muchy umrą.
Po co najmniej trzech powtórzonych eksperymentach wykreśl średni odsetek muszek, które przeżyły w ciągu dnia, aby wygenerować średnie krzywe przeżycia dla każdego stanu. W tym przykładzie zobaczymy, jak wygenerować krzywe przeżycia dla kohort leczonych substancjami chemicznymi zaburzającymi funkcjonowanie układu hormonalnego.
- W protokole długości życia najpierw ustaw 20 fiolek z ośmioma samicami i czterema mężczyznami, z których każda jest wypełniona 10 mililitrami mąki kukurydzianej i umieść je w temperaturze 25 stopni Celsjusza. Po czterech dniach należy wyrzucić muchy i umieścić fiolki z powrotem w inkubatorze. Późnym popołudniem dnia 9 należy usunąć wszystkie nowo pojawiające się muchy z fiolek i umieścić je z powrotem w inkubatorze.
Po 16 do 24 godzinach podzielić na 250 jednodniowych dorosłych much obu płci na cztery grupy pod lekkim znieczuleniem dwutlenkiem węgla i przenieść je do 250 mililitrowych butelek zawierających pokarm dla dorosłych, trzy uzupełnione różnymi stężeniami EDC i jedną z samym rozpuszczalnikiem EE2. Utrzymuj muchy w temperaturze 25 stopni Celsjusza przez dwa do trzech dni, aby umożliwić im łączenie się w pary. Następnie posortuj każdą kohortę much według płci na dwie grupy. W ramach każdego warunku leczenia dla obu płci, losowo podzielić każdą grupę na pięć równoległych fiolek o gęstości 20 osobników na fiolkę. Przygotuj arkusz kalkulacyjny długości życia, w którym liczba martwych much jest odejmowana od liczby much, które przeżyły z poprzedniego transferu, tak aby automatycznie uzyskiwana była liczba ocalałych przy każdym transferze.
Po trzech dniach przenieś muszki bez znieczulenia do nowych fiolek zawierających odpowiedni pokarm w tym samym czasie i sprawdź, czy nie padły. Zapisz wiek much i liczbę martwych much. Powtarzaj transfer co trzy dni, aż wszystkie muchy umrą.