JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 5:08 min. • April 30th, 2023
- Po pierwsze, immunobarwią larwy Drosophila markerami, które podkreślają różne aspekty NMJ lub połączeń nerwowo-mięśniowych. Jest to obszar, w którym zakończenie aksonu neuronu ruchowego styka się z mięśniem, a jego morfologia jest wykorzystywana jako odczyt funkcji synaptycznej.
Akson kończy się kilkoma gałęziami, które tworzą wybrzuszenia zwane boutonami. Neuroprzekaźniki są uwalniane z butonów i powodują skurcz mięśni. Obszary uwalniania neuroprzekaźników nazywane są strefami aktywnymi. W tym przypadku jeden marker jest specyficzny dla białka synaptycznego, które określa NMJ, a drugi marker jest dla białka obecnego w strefach aktywnych.
Następnie pozyskaj obrazy NMJ za pomocą mikroskopii i oceń ilościowo ich morfologię za pomocą półautomatycznego oprogramowania do analizy obrazu. Zastosuj predefiniowaną serię poleceń programowych do obrazów. Pliki wyjściowe zawierają przeanalizowane obrazy NMJ i wyniki morfologii. Cechy, które można zmierzyć, obejmują liczbę i powierzchnię butonów, długość i liczbę rozgałęzień NMJ, liczbę niepołączonych przedziałów NMJ oraz liczbę aktywnych stref.
W poniższym przykładzie przeanalizujemy morfologię Drosophila NMJ barwionych DLG1, markerem postsy
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych