JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 4:49 min. • April 30th, 2023
- Zacznij od zamontowania czystej, znieczulonej larwy pod szklaną szkiełkiem nakrywkową z głową do góry. Następnie odsłoń obszar zainteresowania, delikatnie naciskając szkiełko nakrywkowe, aby zwinąć larwę i dostosować jej położenie. Użyj obrazowania konfokalnego, aby zlokalizować larwy komórek nerwowych. Zidentyfikuj określony akson na jednej z docelowych komórek nerwowych jako miejsce urazu.
Następnie wystaw akson docelowy na działanie lasera dwufotonowego o mocy wyższej niż używana do obrazowania w celu wywołania uszkodzenia. Laser dwufotonowy jest stosowany ze względu na jego zdolność do penetracji i precyzyjnego lokalizowania uszkodzeń w żywej tkance przy minimalnym uszkodzeniu otaczającej tkanki.
Przerwij ekspozycję na laser natychmiast, gdy dojdzie do uszkodzenia docelowego neuronu, co spowoduje aksotomię lub odcięcie aksonu. Na koniec zobrazuj uszkodzony neuron, aby zobaczyć jego degenerację i późniejszą regenerację w pożądanych punktach czasowych.
W przykładowym protokole zamontujemy larwę do mikroskopii, wywołamy uszkodzenie neuronów czuciowych larw i będziemy śledzić regenerację neuronów.
- Zacznij od znieczulenia larw. W dygestorium umieść 60-milimetrowe szklane naczyni
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych