JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 3:48 min. • April 30th, 2023
- Kiedy wstrzyknięte zarodki rozwijają się w dorosłe osobniki G0, należy skrzyżować wszystkie pojedyncze muszki z odpowiednimi stadami równoważącymi, aby rozszerzyć potencjalne linie edytowane przez F1 CRISPR i być w stanie śledzić dziedziczenie modyfikacji genomu. Następnie, skrzyżuj losowo wybrane pojedyncze samce F1 z odpowiednimi samicami równoważącymi, aby móc odzyskać potomstwo, jeśli samiec F1 jest pozytywny dla mutacji. Po przeprowadzeniu krzyżówki przenieś samca F1 do rurki w celu przebadania.
Aby wyekstrahować genomowe DNA, zgnieć muchę za pomocą końcówki pipety zawierającej bufor ekstrakcyjny. Gdy tkanka zostanie rozbita, wyrzuć płyn. Bufor ekstrakcyjny zawiera proteinazę K, enzym, który trawi białka w próbce i jest inaktywowany przez wysoką temperaturę.
Teraz, gdy DNA jest dostępne, przejdź do badań przesiewowych PCR. Na przykład użyj starterów zaprojektowanych do amplifikacji regionu, który zawiera nową sekwencję. Tylko w obecności modyfikacji drugie wiązanie startera i produkt PCR zostaną amplifikowane. W tym przykładzie zobaczymy muchy hodowane i badane przesiewowo metodą PCR w celu wprowadzenia sekwencji transaktywacyjnej zastępującej pierwszy ekson genu bezgałęziow
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych