Osadzanie dorosłych głów Drosophila w parafinie: przygotowanie tkanki do histologii

- Aby unieruchomić muchy do osadzania parafiny, ostrożnie wepchnij znieczuloną Drosophilę przez szczelinę w kołnierzu przeciw owadom, tak aby ich głowy były równomiernie umieszczone na górze urządzenia, jednocześnie przylegając do reszty ciała. W celu utrwalenia tkanek umieść obroże w roztworze Carnoya. Carnoy's to denaturujący środek utrwalający składający się z etanolu, chloroformu i kwasu octowego.

Aby przygotować próbkę do infiltracji parafiny, należy odwodnić tkankę, przenosząc kołnierz przez stopniowane stężenia etanolu. Następnie przenieś obrożę do benzoesanu metylu, rozpuszczalnika organicznego. Następnie umieść go w benozoinie metylu i stopionym roztworze parafiny podczas podgrzewania, aby upewnić się, że parafina pozostanie stopiona. Przejdź do skomplikowanej serii etapów mycia za pomocą wstępnie podgrzanej parafiny w celu usunięcia benzoesanu metylu.

Następnie szybko umieść obrożę w foremce i wlej roztopioną parafinę, aby całkowicie ją pokryła. Gdy parafina stwardnieje, wyjmij blok z formy i użyj żyletki, aby przyciąć nadmiar parafiny. Oderwij kołnierz, pozostawiając rząd głów osadzonych w bloku parafinowym. W przykładowym protokole zobaczymy procedurę zademonstrowaną do