Przygotowanie filetów larwalnych: metoda wizualizacji nienaruszonych neuronów czuciowych i związanych z nimi komórek naskórka

- Aby ustawić larwę do rozbioru fileta, umieść ją w naczyniu pokrytym silikonem zawierającym zimną sól fizjologiczną i zidentyfikuj jej stronę grzbietową i brzuszną. Rurki tchawicze biegnące wzdłuż jego długości wyznaczają stronę grzbietową, natomiast pasy ząbkowe brzuszne identyfikują stronę brzuszną.

Następnie, brzuszną stroną do góry, delikatnie rozciągnij larwę i przypnij każdy koniec do dna naczynia. Ta pozycja utrzyma grzbietowe skupiska czuciowych neuronów wielodendrytycznych i związanych z nimi komórek naskórka w stanie nienaruszonym w miarę postępu sekcji.

Użyj nożyczek do preparowania, aby przeciąć wzdłuż brzusznej linii środkowej larwy. Przypnij naskórek do płytki, aby spłaszczyć preparat i usunąć struktury wewnętrzne, aby odsłonić leżącą pod spodem tkankę mięśniową. Następnie należy ostrożnie usunąć odpowiedni mięsień, aby odsłonić naskórek i uzyskać dostęp do wcześniej zasłoniętych neuronów, zachowując jednocześnie ich dendrytyczną morfologię.

W przykładowym protokole zobaczymy szczegółową demonstrację przygotowania filetów larwalnych i usuwania mięśni w celu wyświetlenia neuronów czuciowych i komórek naskórka.

- Na początek dodaj tyle zimnej soli fizjologicznej do nac