Liczenie jednostek tworzących kolonie (CFU): Kwantyfikacja bakterii z ciał much
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 3:55 min. • April 30th, 2023
- Najpierw zbierz muchy na pożądanym etapie rozwoju i umieść je w sterylnej probówce. Aby policzyć tylko mikrobiotę wewnętrzną, wysterylizuj zewnętrzną część much, zanurzając ją w 70% etanolu. Aby zmierzyć zarówno wewnętrzną, jak i zewnętrzną mikrobiotę, pomiń ten etap sterylizacji. Następnie zmiel muchy w niewielkiej objętości pożywki bakteryjnej za pomocą kulek ceramicznych i homogenizatora tkankowego lub ręcznie za pomocą tłuczka. Należy zachować ostrożność, aby nie wprowadzać bakterii ze źródeł zewnętrznych, aby zapobiec zanieczyszczeniu próbek.
Powinieneś teraz mieć jednorodną mieszaninę zawierającą bakterie, które możesz hodować. Zwiększyć objętość homogenatu za pomocą płynnej pożywki bakteryjnej. Wykonaj seryjne rozcieńczenia homogenatu i umieść stałą objętość tych rozcieńczeń na odpowiedniej stałej pożywce wzrostowej dla twoich bakterii. W miarę wzrostu bakterii na talerzu tworzą się kolonie. Znajdź rozcieńczenie, które ma zakres od 10 do 100 kolonii, aby określić jednostki tworzące kolonie lub CFU próbki.
W przykładowym protokole zaszczepimy sterylne muszki gnotobiotykiem lub zdefiniowaną kulturą bakteryjną oraz zbierzemy i zmierzymy CFU.
- Użyj końcówek filtrujących, aby
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych