Śledzenie swobodnie chodzących much: metoda oceny lokomocji u Drosophila

- Użyj zadaszonej areny - na przykład szalki Petriego wypełnionej przezroczystym silikonem - aby muchy mogły swobodnie chodzić, ale nie były w stanie latać wewnątrz areny, gdy jest ona zakryta. Umieść naczynie na białej oświetlonej powierzchni i ustaw kamerę bezpośrednio nad nią.

Przy otwartej pokrywie przenieś znieczulone muchy do naczynia, przykryj je i pozwól badanym dojść do siebie. Muchy będą swobodnie poruszać się po arenie podczas próby. Aby ocenić lokomocję, śledź pozycję każdej muchy w czasie i obliczaj parametry charakteryzujące lokomocję, takie jak odległość przebyta przez każdą muchę. W tym przykładowym protokole zobaczymy demonstrację konfiguracji i analizy testu przy użyciu oprogramowania do śledzenia wideo.

- Aby śledzić ruchy much na szalce Petriego, najpierw wypełnij 6-centymetrową szalkę przezroczystym elastomerem silikonowym, aby stworzyć arenę śledzenia. Pozostaw 3-milimetrową szczelinę między silikonem a pokrywką, aby muchy mogły swobodnie chodzić w szczelinie, ale nie latać. Pod areną śledzenia mają białe tło.

Następnie znieczul cztery muchy z tej samej grupy zabiegowej i umieść je na arenie. Pozwól muchom zaaklimatyzować się przez godzinę na arenie, która powinna być w pełni oświetlona i mieć temperaturę około 22 stopni Celsjusza, nie gorętszą niż temperatura pokojowa. Po godzinie użyj kamery ze sprzężeniem ładunkowym umieszczonej nad areną, aby rejestrować aktywność muchy przez 5 minut.

Po 5-minutowym nagraniu znieczul muszki na arenie i umieść je z powrotem w nowej fiolce domowej. Następnie pozbądź się areny. Później przeanalizuj nagrania za pomocą ogólnodostępnego oprogramowania Ctrax. To oprogramowanie generuje dane śledzenia, które można wyeksportować w formacie zgodnym z językiem programowalnym, takim jak format MATLAB.

Na podstawie danych oblicz odległość przebytą na klatkę, średnią odległość przebytą pieszo dla każdej muchy oraz średnią odległość przebytą na muchę. Aby uzyskać istotność statystyczną, spodziewaj się przetestowania około 100 much na grupę leczoną.