Mechaniczne usuwanie kosmówki i błony witeliny: metoda przygotowania oocytów Drosophila do bezpośredniej obserwacji

- Zacznij od dojrzałych oocytów z ustalonych jajników w roztworze soli fizjologicznej. Dojrzałe oocyty mają skorupki jaj składające się z zewnętrznej kosmówki i wewnętrznej błony witelinowej.

Aby mechanicznie usunąć błonę kosmówkową i błonę witelinową, umieść oocyty między oszronionymi częściami dwóch wstępnie przygotowanych szkiełek. Przesuwaj górny suwak prostymi ruchami w przód iw tył, aby wytworzyć tarcie, które toczy oocyty.

Teraz przesuń górny suwak pod niewielkim kątem, aby przetoczyć oocyty w innym kierunku. Unikając ruchu okrężnego, zwiększaj ten kąt w krótkich odstępach, aż górny suwak przesunie się prostopadle do dolnego suwaka. Ruch ten mechanicznie usuwa kosmówkę i błony witelinowe, umożliwiając dostęp sond lub barwników do oocytu.

Oocyty bez kosmówki będą wyglądały na długie i cienkie, a te bez błon witelinowych będą miały spiczaste końce. Aby oddzielić oczyszczone oocyty od otaczających je szczątków, przenieś mieszaninę próbek do probówki i pozwól oocytom osiąść na dnie, podczas gdy zanieczyszczenia unoszą się na górze i można je usunąć.

W tym protokole usuniemy błony kosmówkowe i błony żółciowe z dojrzałych oocytów Drosophila.

- Aby oddzielić oocyty w późnym stadium