C. elegans (C. elegans) Wytłaczanie gonad: technika szybkiej sekcji

0 wyświetleń2:59 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- W probówce zawierającej bufor M9 zbierz do 150 robaków hermafrodytycznych na pożądanym etapie rozwoju. Usunąć bakterie z robaków, przemywając je buforem M9 i odwirowując próbkę.

Obejrzyj probówkę pod mikroskopem preparacyjnym podczas usuwania supernatantu, aby zapobiec utracie próbki. Przenieś robaki do szklanego naczynia z minimalną objętością buforu M9. Dodaj lewamizol, aby znieczulić robaki.

Zlokalizuj głowę robaka i gardło lub jelito przednie, które zawiera dwie struktury w kształcie cebulki. Użyłem dwóch igieł, aby przeciąć robaka za gardłem. Upewnij się, że sekcja została zakończona szybko, aby uniknąć wpływu na tkankę.

Gdy naskórek zostanie przerwany, dwa ramiona gonad są wytłaczane lub wypychane z ciała z powodu wewnętrznego ciśnienia robaka.

W tym przykładzie przeanalizujemy gonady dorosłych robaków w celu analizy immunofluorescencyjnej.

- Wybierz od 100 do 150 robaków w pożądanym stadium rozwoju i zbierz je w 1,5-mililitrowej probówce mikrowirówkowej zawierającej 100 mikrolitrów buforu M9. Następnie napełnij probówkę mikrowirówkową 900 dodatkowymi mikrolitrami buforu M9 i odwiruj ją z prędkością 1,000 razy g przez 1 minutę w temperaturze pokojowej.

Pod mikroskopem preparacyjnym delikatnie usuń 900 mikrolitrów bufora M9. Następnie powtórz pranie jeszcze dwa razy, aby usunąć większość przyczepionych bakterii.

Następnie, za pomocą końcówki do mikropipet o pojemności 200 mikrolitrów z poszerzonym otworem, przenieś robaki w 100 mikrolitrach buforu M9 do szklanej czaszy z płaskim dnem. Następnie dodaj od 1 do 3 mikrolitrów 0,1-molowego lewamizolu do naczynia i delikatnie zamieszaj. Teraz przymocuj dwie igły o rozmiarze 25 do dwóch strzykawek, aby zrobić jedno narzędzie preparacyjne na każdą rękę.

Pod mikroskopem preparacyjnym umieść każdą igłę pod i nad każdym robakiem i wykonaj drobne nacięcie na każdym robaku w pobliżu drugiej opuszki gardłowej za pomocą ruchu przypominającego nożyce. Pokrój wszystkie zwierzęta co najmniej raz w ciągu pięciu minut, aby lewamizol pozostał skuteczny.

- Bardzo ważne jest, aby sekcja zwierząt w naczyniu została zakończona w czasie krótszym niż pięć minut.

- W przypadku, gdy wyciśnięta gonada nie jest widoczna, po prostu pomiń to zwierzę. Widoczne są tu właściwe wytłoczone gonady.

09:52

Wizualizacja cytokinezy neuroblastów podczas embriogenezy C. elegans

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

08:37

Szybki i łatwy proces generowania punktowych mutantów genomowych u C. elegans przy użyciu rybonukleoprotein CRISPR/Cas9

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

06:58

Analiza cyklu komórkowego w linii zarodkowej C. elegans z analogiem tymidyny EdU

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

15:19

Analiza i nagrywanie z połączenia nerwowo-mięśniowego C. elegans

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

03:41

C. elegans (C. elegans) Rozwarstwienie blastomerów: metoda usuwania skorupki jaja i dysocjacji komórek embrionalnych

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

03:59

Mikroiniekcja gonad: metoda dostarczania związków bezpośrednio do linii rozrodczej C. elegans

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:46

Nowe wskaźniki charakteryzujące wydłużenie embrionalne nicieni Caenorhabditis elegans

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

08:40

Analiza przestrzenna i czasowa aktywnego ERK w linii rozrodczej C. elegans

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:43

Rozwarstwienie larw tkanki gonad danio pręgowanego

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:07

Pomiar przewodnictwa i ruchliwości plemników w hermafrodytowym układzie rozrodczym Caenorhabditis elegans

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

Ostatnia aktualizacja: 1 sierpnia 2026