JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 2:09 min. • April 30th, 2023
- Najpierw umieść szkiełko mikroskopowe między dwoma innymi szkiełkami za pomocą taśmy. Zapewniają one podparcie i przekładki do przygotowania padu agarozowego. Następnie umieść kroplę stopionej agarozy na szkiełku. Natychmiast dociśnij go kolejnym suwakiem.
Po zestaleniu się agarozy ostrożnie oddziel szkiełka, aby agaroza pozostała na jednym szkiełku. Zawsze używaj świeżo przygotowanych podpasek, ponieważ wysuszone podpaski mogą odwodnić zwierzęta. Upewnij się, że nie ma pęknięć ani pęcherzyków, które mogą zakłócić integralność klocków.
Następnie dodaj kroplę środka znieczulającego do środka podkładki i przenieś do niej od 10 do 15 zwierząt, przynosząc ze sobą jak najmniej bakterii. Nadmiar bakterii może zakłócać obrazowanie. Jeśli roztwór znieczulający wyschnie, dodaj drugą kroplę na zwierzęta.
Delikatnie umieść szkiełko nakrywkowe na podkładce. Unikaj tworzenia się pęcherzyków lub wywierania na niego zbyt dużego nacisku, aby zapobiec uszkodzeniu zwierząt. Na koniec oznacz slajd, który jest gotowy do obrazowania.
- Zacznij od przygotowania preparatów do obrazowania. Umieść kroplę stopionej agarozy na szkiełku mikroskopowym i natychmiast dociśnij kroplę innym szkiełkiem mikroskopowym, delikatnie spłaszczając agarozę Agaroza musi wyschnąć przez minutę.
Następnie ostrożnie oddziel oba szkiełka i pozostaw zestaloną podkładkę na jednym ze szkiełek. Umieść szkiełko na stoliku mikroskopu i dodaj kroplę środka znieczulającego o pojemności od 5 do 10 mikrolitrów na środek podkładki agras.
Użyj sterylizowanego termicznie kilofa, aby szybko przenieść 10 do 15 zwierząt z talerza podstawowego do kropli środka znieczulającego, zanim roztwór wyschnie. Następnie nałóż szkiełko nakrywkowe, umieszczając je tuż nad wacikiem agarozowym i delikatnie upuszczając w dół.