JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 2:44 min. • April 30th, 2023
- W przypadku analizy PCR na pojedynczym robaku pozwól robakowi hermafrodytycznemu na samozapłodnienie i złożenie jaj, które wyprodukują genetycznie identyczne potomstwo, a tym samym zachowaj kopię zmodyfikowanego szczepu. Następnie przenieś rodzica do probówki zawierającej bufor do lizy robaków.
Zamroź probówkę w temperaturze minus 80 stopni Celsjusza, aby rozerwać naskórek lub zewnętrzną warstwę. Podgrzej próbkę do temperatury plus 60 stopni Celsjusza, aby zlizować komórki robaka, uwalniając białka wewnątrzkomórkowe wraz z genomowym DNA komórki. W tej temperaturze proteinaza K w buforze degraduje białka, szczególnie nukleazy, które w przeciwnym razie zniszczyłyby genomowe DNA.
Następnie podnieś temperaturę do 95 stopni Celsjusza, aby dezaktywować enzym. Na koniec dodaj lizat komórkowy do probówki z główną mieszanką PCR składającą się z buforu reakcyjnego, dNTP, starterów do przodu i do tyłu dla obszaru zainteresowania, polimerazy taq i wody, doprowadzając reakcję do pożądanej objętości końcowej. Aby wykonać PCR, uruchom odpowiedni program termocyklera, który amplifikuje interesujący nas region DNA.
W poniższym przykładzie zobaczymy procedurę PCR do badania przesiewowego pod kątem
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych