Barwienie czerwienią nilową C. elegans: metoda wizualizacji kropelek lipidów u zwierząt utrwalonych

0 wyświetleń3:34 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- Podczas wizualizacji kropelek lipidów, wewnątrzkomórkowych organelli magazynujących obojętne lipidy, zacznij od dodania do próbki roztworu detergentu, takiego jak roztwór zawierający Triton X-100. To przeniknie do komórek robaka. Następnie należy utrwalić próbkę w odpowiednim stężeniu izopropanolu, na przykład 40%.

Następnie dodaj czerwień nilową do próbki i chroń ją przed światłem, ponieważ barwnik jest wrażliwy na światło. Utrwalenie umożliwia barwnikowi dostęp do kropelek lipidów w całym zwierzęciu. Czerwień Nilowa jest barwnikiem lipofilowym, którego widmo emisji fluorescencji zależy od polarności lokalnego środowiska lipidowego.

Po wystawieniu na działanie polarnych lipidów, takich jak fosfolipidy, widmo emisyjne czerwieni nilowej znajduje się w wyższych, czerwonych długościach fal. Po wystawieniu na działanie obojętnych lipidów, takich jak triacyloglicerole i estry steroli w neutralnym rdzeniu kropelek lipidów, widmo emisyjne czerwieni nilowej przesuwa się na niższe, żółto-złote długości fal.

Dlatego użyj zielonego kanału mikroskopu fluorescencyjnego, który będzie zbierał emisje o długości fali żółto-złotej, aby uwidocznić czerwone zabarwienie kropelek lipidów w całym zwierzęciu. W przykładowym protokole zobaczymy procedurę barwienia czerwienią nilową i obrazowanie kropelek lipidów w utrwalonych próbkach.

- Aby przeprowadzić barwienie lipidów czerwienią nilową, robaki płytkowe na pożywce wzrostowej nicieni lub NGM wysiane późną logarytmią OP50 E. coli i hodują robaki w temperaturze od 20 stopni Celsjusza do wczesnego stadium L4. Umyj robaki 1 mililitrem roztworu PBST i przenieś zawiesinę robaka do 1,5 mililitrowej probówki do mikrofuge.

Odwirować robaki pod 560-krotnością grawitacji przez jedną minutę, następnie usunąć supernatant i powtarzać płukanie PBST, aż E. coli zostanie usunięta z zawiesiny. Następnie do osadu robaka dodaj 100 mikrolitrów 40% izopropanolu lub 60% do barwienia ORO i inkubuj próbkę w temperaturze pokojowej przez trzy minuty.

- Dodatek izopropanolu jest kluczowy dla prawidłowego przenikania robaków przed barwieniem.

- Odwiruj robaki pod 560-krotnością grawitacji przez jedną minutę i usuń supernatant bez naruszania osadu robaka.

- Ważne jest, aby zminimalizować ekspozycję na światło podczas etapów wirowania.

- Teraz, będąc w ciemności, dodaj 600 mikrolitrów wcześniej przygotowanego roztworu roboczego NR do każdej próbki. Odwróć probówki trzy razy i całkowicie wymieszaj robaki i roztwór. Następnie inkubować próbkę w ciemności w temperaturze pokojowej przez dwie godziny.

Po inkubacji odwirować robaki i usunąć supernatant. Następnie dodaj 600 mikrolitrów PBST i inkubuj próbki w ciemności przez 30 minut, aby usunąć nadmiar plamy NR. Po ponownym odwirowaniu próbek, jak poprzednio, usunąć wszystkie z wyjątkiem około 50 mikrolitrów supernatantu.

16:07

Biochemiczna i wysokoprzepustowa ocena mikroskopowa masy tłuszczowej w Caenorhabditis elegans

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

11:08

Hodowla zielonych mikroalg w fotobioreaktorach z kolumnami bąbelkowymi i test na obecność obojętnych lipidów

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:12

Test oparty na fluorescencji do charakterystyki i kwantyfikacji tworzenia kropelek lipidów w organoidach jelitowych człowieka

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

08:22

Wizualizacja struktur kutykularnych Caenorhabditis elegans za pomocą lipofilowego barwnika witalnego DiI

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

03:32

Barwienie czerwienią nilową: technika wykrywania i ilościowego oznaczania wewnątrzkomórkowych obojętnych lipidów w algach

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

12:15

Jelito C. elegans jako model morfogenezy światła międzykomórkowego i biogenezy błony spolaryzowanej in vivo na poziomie pojedynczej komórki: znakowanie przez barwienie przeciwciałami, analiza utraty funkcji RNAi i obrazowanie

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

07:46

Kwantyfikacja obfitości lipidów i ocena rozmieszczenia lipidów w Caenorhabditis elegans za pomocą barwienia czerwienią nilową i czerwienią olejową O

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

05:37

Rozwarstwienie i barwienie kropelkami lipidów enocytów u larw Drosophila

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:59

Bezznacznikowe obrazowanie dynamiki magazynowania lipidów u Caenorhabditis elegans przy użyciu mikroskopii wymuszonego rozpraszania Ramana

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

07:12

Analiza fluorescencyjnie barwionych kropelek lipidów z rekonstrukcją 3D w celu oceny stłuszczenia wątroby

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

Ostatnia aktualizacja: 1 sierpnia 2026