Barwienie czerwienią nilową C. elegans: metoda wizualizacji kropelek lipidów u zwierząt utrwalonych

- Podczas wizualizacji kropelek lipidów, wewnątrzkomórkowych organelli magazynujących obojętne lipidy, zacznij od dodania do próbki roztworu detergentu, takiego jak roztwór zawierający Triton X-100. To przeniknie do komórek robaka. Następnie należy utrwalić próbkę w odpowiednim stężeniu izopropanolu, na przykład 40%.

Następnie dodaj czerwień nilową do próbki i chroń ją przed światłem, ponieważ barwnik jest wrażliwy na światło. Utrwalenie umożliwia barwnikowi dostęp do kropelek lipidów w całym zwierzęciu. Czerwień Nilowa jest barwnikiem lipofilowym, którego widmo emisji fluorescencji zależy od polarności lokalnego środowiska lipidowego.

Po wystawieniu na działanie polarnych lipidów, takich jak fosfolipidy, widmo emisyjne czerwieni nilowej znajduje się w wyższych, czerwonych długościach fal. Po wystawieniu na działanie obojętnych lipidów, takich jak triacyloglicerole i estry steroli w neutralnym rdzeniu kropelek lipidów, widmo emisyjne czerwieni nilowej przesuwa się na niższe, żółto-złote długości fal.

Dlatego użyj zielonego kanału mikroskopu fluorescencyjnego, który będzie zbierał emisje o długości fali żółto-złotej, aby uwidocznić czerwone zabarwienie kropelek lipidów w całym zwier