Dysocjacja pojedynczych komórek Caenorhabditis elegans: metoda izolowania żywych komórek
JoVE Encyclopedia of Experiments
Biologia
0 wyświetleń • 4:51 min • April 30th, 2023
Loading...
Przegląd
Ten artykuł przedstawia protokół dotyczący dysocjacji transgenicznych robaków ekspresujących GFP w neuronach w celu izolacji i analizy określonych populacji komórek. Metoda polega na użyciu buforów lizujących i technik wirowania w celu uzyskania żywej zawiesiny komórek do dalszych eksperymentów.
Kluczowe elementy badania
Obszar nauki
- Neuronauka
- Biologia komórki
- Genetyka
Tło
- Transgeniczne robaki są wartościowe w badaniach nad funkcją neuronów.
- Techniki dysocjacji komórek są kluczowe dla izolacji określonych typów komórek.
- Właściwe postępowanie z buforami lizującymi jest istotne dla utrzymania żywotności komórek.
- Izolacja komórek może ułatwić różne zastosowania w dalszym ciągu.
Cel badania
- Rozwój niezawodnej metody izolacji neuronów z transgenicznych robaków.
- Analiza izolowanych komórek dla celów badawczych.
- Zgłębienie rozumienia właściwości i funkcji neuronów.
Stosowane metody
- Robaki są płukane i traktowane buforem lizującym zawierającym SDS i DTT.
- Zastosowanie perturbacji mechanicznej w celu ułatwienia dysocjacji komórek.
- Komórki są osadzane i płukane wielokrotnie w celu usunięcia zanieczyszczeń.
- Enzymy proteazy są używane do rozkładania połączeń między komórkami w celu izolacji.
Główne wyniki
- Udało się dysocjować komórki robaków z minimalną śmiercią komórek.
- Izolowane komórki były nadające się do krótkotrwałej kultury i analizy.
- Pomiar gęstości komórek potwierdził żywotność izolowanych komórek.
- Wizyjna inspekcja pod mikroskopem wykazała skuteczne strawienie kutykuli.
Wnioski
- Protokół zapewnia solidną metodę izolacji komórek neuronowych z transgenicznych robaków.
- Opiekuńcze postępowanie z reagentami jest kluczowe dla utrzymania integralności komórek.
- Ta metoda może być zastosowana do różnych badań obejmujących analizę neuronów.
Często zadawane pytania
Jaki jest główny cel protokołu?
Głównym celem jest izolacja i analiza określonych komórek neuronowych z transgenicznych robaków.
Jak zapewniasz żywotność komórek w trakcie procesu?
Poprzez staranne zarządzanie ekspozycją na bufory lizujące i zastosowanie odpowiednich technik płukania.
Jaki rodzaj robaków jest stosowany w tym protokole?
Do izolacji stosuje się transgeniczne robaki ekspresujące GFP w określonych neuronach.
Jaką rolę odgrywa enzym proteazy?
Enzym proteazy pomaga w rozkładaniu połączeń międzykomórkowych w celu skutecznej dysocjacji.
Jak ocenia się sukces dysocjacji komórek?
Sukces ocenia się poprzez inspekcję wizualną pod mikroskopem i pomiar gęstości komórek.
Czy można hodować izolowane komórki?
Tak, izolowane komórki mogą być używane do krótkotrwałej kultury.
Executive Industry Relevance
Single-cell dissociation of Caenorhabditis elegans enables isolation of live, intact cells for downstream applications such as FACS and immunoprecipitation. This capability supports high-resolution analysis of specific cell populations, facilitating mechanistic de-risking and target validation in early discovery. The method enhances predictive confidence for translational research by providing viable, quantifiable cell suspensions from a genetically tractable model organism.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables isolation of defined cell populations for pathway interrogation and functional studies.
- Supports biological de-risking by providing live cells for mechanistic assays.
- Facilitates target validation through cell-type specific analysis and sorting.
Screening & Assay Development
- Generates single-cell suspensions suitable for quantitative FACS-based assays.
- Improves assay reproducibility by standardizing cell preparation from whole organisms.
- Enables scalable preparation of cells for high-throughput screening platforms.
Translational & Preclinical Research
- Provides access to disease-relevant cell types for biomarker discovery and validation.
- Ensures continuity from genetic model systems to preclinical cellular assays.
- Reduces risk in translational workflows by enabling robust cell isolation protocols.
Pipeline & Workflow Integration
This dissociation protocol fits at the interface of early discovery and lead identification, supplying viable cells for downstream phenotypic screening and mechanistic studies.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing by enabling isolation and analysis of genetically defined cell types.
- Screening: Delivers reproducible, quantitative cell suspensions for FACS and immunoprecipitation workflows.
- Analytics: Provides cell density and viability measurements to benchmark sample quality across experiments.
- Translational Research: Bridges model organism genetics with preclinical cellular assays for biomarker alignment.
- Enterprise Reuse: Establishes a standardized, reusable protocol for isolating live cells from C. elegans across R&D teams.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in target validation.
- Operational Value: Standardizes cell isolation, improving reproducibility and scalability for screening campaigns.
- Strategic Value: Enables better go/no-go decisions by providing high-quality cellular inputs for downstream assays.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization by enabling robust, cross-functional cell-based analyses.
Implementation Considerations
- Requires expertise in handling live model organisms and cell dissociation techniques.
- Needs access to centrifugation, FACS, and cell counting instrumentation.
- Demands strict buffer osmolarity and reagent quality control for cell viability.
- Must be adapted for different transgenic lines or cell types as needed.
- Cell viability and yield may vary depending on protocol adherence and sample quality.
Biopharma FAQs
Why does null hypothesis testing matter for FACS-isolated neuron validation?
Null hypothesis testing ensures that observed differences in FACS-isolated neuron populations are statistically significant, supporting robust target validation and reducing false positives in early discovery.
How does independent variable isolation fit the cell dissociation workflow?
Isolating independent variables, such as specific transgenic markers, allows precise separation and analysis of targeted cell populations, enhancing mechanistic clarity in the discovery pipeline.
What do quantitative cell density measurements enable in this protocol?
Quantitative cell density measurements provide objective benchmarks for sample quality, enabling reproducible downstream assays and facilitating cross-experiment comparisons in R&D workflows.
Why are replication requirements critical for cross-functional cell isolation studies?
Replication ensures that cell isolation yields and viability are consistent across experiments, supporting reliable data generation and collaboration between discovery and screening teams.
What statistical analysis capabilities are required before implementing FACS-based cell sorting?
Statistical analysis of cell viability, density, and population purity is essential to validate the quality of isolated cells, ensuring readiness for downstream FACS-based applications and minimizing experimental risk.
11:01
Izolacja i hodowla neurosfer mózgowych dorosłych danio pręgowanego
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
09:29
Izolacja i transfer adoptywny komórek dendrytycznych prezentujących antygen traktowany wysoką solą
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
11:34
Sekwencjonowanie i analiza RNA pojedynczych komórek ludzkich wysp trzustkowych
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
03:41
C. elegans (C. elegans) Rozwarstwienie blastomerów: metoda usuwania skorupki jaja i dysocjacji komórek embrionalnych
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
03:10
Trawienie enzymatyczne i dysocjacja ręczna: metoda przygotowania zarodków C. elegans do hodowli komórkowej
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
02:10
Izolacja neuronów z Caenorhabditis elegans poprzez sortowanie komórek aktywowane fluorescencją
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
09:10
Metoda hodowli embrionalnych komórek C. elegans
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
09:42
Izolacja określonych populacji neuronów od glisty Caenorhabditis elegans
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
06:09
Izolacja aktywnego ekstraktu jądrowego Caenorhabditis elegans i rekonstytucja do transkrypcji in vitro
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
08:57
Mikrodysekcja laserowa do zastosowań jednotkankowych niezależnych od gatunku
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Ostatnia aktualizacja: 1 sierpnia 2026