JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 4:51 min. • April 30th, 2023
- Zacznij od umytych granulowanych robaków i dodaj bufor do lizy zawierający SDS, detergent i DTT, środek redukujący. To rozbija ochronny naskórek robaka, odsłaniając ciało na dysocjację komórek. Unikaj długotrwałego narażenia na bufor do lizy, aby zminimalizować lizę i śmierć komórek.
Następnie usuń odczynniki do lizy za pomocą kilku popłuczyn zimnego buforu izolacyjnego. Ważne jest, aby ten bufor miał prawidłową osmolarność, aby zapobiec śmierci komórki. Użyj enzymu proteazy do rozbicia połączeń komórka-komórka. Wspomóż proces homogenizacji wraz z energią mechaniczną, pipetując mieszaninę do ścianki probówki.
Dodaj pożywkę zawierającą surowicę, aby zatrzymać reakcję enzymatyczną i antybiotyki, aby zapobiec zanieczyszczeniu. Osadzać i kilkakrotnie umyć próbkę, aby usunąć większość zanieczyszczeń.
Na koniec umieść rurkę na lodzie, aby umożliwić sedymentację grawitacyjną. Zanieczyszczenia, w tym resztki naskórka lub grudki komórek, osiądą, podczas gdy zdysocjowane komórki pozostaną zawieszone w górnej warstwie podłoża. Komórki te mogą być wykorzystywane do krótkotrwałej hodowli lub do izolowania określonych populacji komórek za pomocą FACS lub immunoprecypitacji.
W przykładowym prot
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych