Utrwalanie etanolu i barwienie DAPI: metoda wizualizacji DNA u C. elegans
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 3:32 min. • April 30th, 2023
- Zacznij od kropli roztworu buforowego na szkiełku mikroskopowym i przenieś nienaruszone robaki do kropli. Gdy robaki znajdą się na miejscu, użyj niestrzępiącej się chusteczki, aby wchłonąć i usunąć bufor. Utrwal próbkę, kąpiąc próbki w 90% etanolu kilka razy, pozwalając mu odparować po każdym zastosowaniu.
Gdy etanol odparuje po ostatnim płukaniu, dodaj do próbki roztwór zawierający barwnik kwasu nukleinowego, DAPI. DAPI wiąże się preferencyjnie z zasadami adeniny i tyminy w mniejszym rowku DNA. Po związaniu kompleks DAPI-DNA pochłania światło UV i emituje widzialne światło niebieskie.
Następnie dodaj środek konserwujący zapobiegający blaknięciu, aby przedłużyć okres trwałości próbki. Nałóż szkiełko nakrywkowe i uszczelnij je do szkiełka. Następnie użyj mikroskopu fluorescencyjnego z niebieskim filtrem, aby uwidocznić ciała DAPI, które w zależności od komórki i jej statusu cyklu mogą reprezentować pojedyncze chromosomy, pary chromatyd siostrzanych lub całe jądra. W tym eksperymencie policzymy pary chromatyd siostrzanych barwionych DAPI w oocytach, aby zidentyfikować tetraploidalne szczepy Caenorhabditis elegans.
- Szczepy tetraploidalne mają 12 par chromosomów, które można zwalid
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych