Test plamki świetlnej: metoda badania zachowania fototaktycznego Drosophila

- Zacznij od wybrania trzeciej larwy w stadium rozwojowym, największej z form larwalnych, z pożywki hodowlanej i umyj ją wodą, aby usunąć pokarm. Ponieważ oczy larwy lub narządy Bolwiga znajdują się w górnej przedniej części larwy, umieść larwę na środku płytki agarowej ze źródłem światła nad zwierzęciem. Wyłącz światło w pomieszczeniu i pozwól larwie zaaklimatyzować się w ciemności.

Ponieważ larwa jest ledwo wykrywalna w jasnym punkcie utworzonym przez światło widzialne, włącz diody LED na podczerwień, aby oświetlić zwierzę do kamery. Poczekaj, aż zwierzę zacznie czołgać się prosto, aby kontrolować swoją ścieżkę. A następnie obróć płytkę tak, aby larwa czołgała się bezpośrednio w kierunku plamki świetlnej. Nagraj zwierzę czołgające się do światła, a następnie oddalające się od punktu świetlnego. Ta taktyka unikania światła pomaga larwom unikać drapieżników poprzez zakopywanie się w pożywieniu.

W poniższym przykładzie przeprowadzimy test plamki świetlnej, aby przetestować zdolność różnych szczepów genetycznych larw Drosophila do ucieczki przed światłem.

- Przed wprowadzeniem larwy do konfiguracji obrazowania należy nagrać krótki film przedstawiający położenie światła i nazwać niefiltrowane wideo w tle kontrolnym "lightarea1". Umieść filtr z powrotem na obiektywie aparatu i włącz światło z dala od urządzenia eksperymentalnego na jak najniższym poziomie, jednocześnie pozwalając na wyraźną obserwację larw. Użyj łyżki, aby usunąć niektóre larwy z pożywki hodowlanej i delikatnie wybierz larwę w trzecim stadium rozwojowym.

Umyj larwę w wodzie destylowanej i umieść larwę na środku płytki agarowej. Delikatnie usuń nadmiar wody z larwy i wyłącz światło w pomieszczeniu. Pozwól larwie zaaklimatyzować się przez dwie minuty w ciemnym otoczeniu przed włączeniem światła LED na podczerwień. Następujący eksperyment z zachowaniem unikania światła należy przeprowadzić w ciemności. Dla wygody demonstracji filmowaliśmy w jasnym świetle.

Delikatnie przeczesz larwę do środka płytki. Kiedy larwa zacznie czołgać się prosto, obróć płytkę, aby larwa skierowała się w stronę jasnego punktu. Kliknij opcję Przechwytywanie, konfiguracja i przechwytywanie wideo, aby wybrać ścieżkę zapisu. I kliknij Rozpocznij nagrywanie, aby nagrywać. Pozwól lawie czołgać się w kierunku, wchodzić i opuszczać punkt świetlny, aż znajdzie się prawie poza polem widzenia, a następnie kliknij w Zatrzymaj nagrywanie.

Odsuń filtr od aparatu i nagraj krótki film przedstawiający położenie plamki świetlnej. Następnie nazwij post jako niefiltrowany film, "lightarea2" i porównaj ten film z filmem "lightarea1", aby upewnić się, że pozycja punktu świetlnego nie została zmieniona.