Drosophila Optogenetyka: metoda manipulowania obwodami neuronalnymi

0 wyświetleń3:01 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- U much Drosophilia zbliżający się bodziec wizualny sygnalizujący zbliżanie się drapieżnika aktywuje obwody neuronalne, które wywołują reakcję ucieczki. Aby manipulować obwodem neuronalnym, który kontroluje taką odpowiedź, należy wyrazić transgeniczną światłoczułą opsynę, taką jak rodopsyna kanałowa-2 w określonych neuronach w tym obwodzie.

Rodopsyna kanałowa jest światłoczułym kanałem kationowym, który otwiera się pod wpływem jasnego niebieskiego światła. Późniejszy napływ jonów sodu zwiększa potencjał czynnościowy, który powoduje, że neuron uruchamia się i przekazuje informacje wzdłuż obwodu. Oprócz bodźca świetlnego, do otwarcia rodopsyny kanałowej wymagany jest kofaktor all-trans-retinal.

Dlatego należy zapewnić all-trans-retinal w pokarmie dla much, ponieważ zwykle występuje on w bardzo małych ilościach. Dodatkowo, badając rolę neuronów w obwodzie neuronalnym zaangażowanym w reakcję na bodziec wzrokowy, użyj much, które są niewidome wizualnie, aby zapobiec innym reakcjom świetlnym.

Na koniec użyj niebieskiego światła LED, aby wywołać to samo zachowanie, które jest spowodowane zbliżającym się bodźcem. W przykładowym protokole zobaczymy przygotowywanie posiłków i reakcję behawioralną wywołaną światłem u much wyrażających rodopsynę kanałową w neuronach płata wzrokowego.

- Zacznij od stopienia standardowego pokarmu na muchy z mąki kukurydzianej w kuchence mikrofalowej i pozwól mu ostygnąć, aż będzie ciepły w dotyku. Po schłodzeniu wymieszaj 50 mikrolitrów wcześniej przygotowanego 20-milimolowego all-trans-retinalu z każdą fiolką. Następnie pozostawić fiolki do ostygnięcia i chronić przed światłem do czasu, gdy będzie to wymagane.

Najpierw krótko znieczul muchy na lodzie. Następnie umieść pojedyncze muchy w końcówkach pipet P1000 z końcówką naciętą tak, aby utworzyła por o średnicy około 2,25 milimetra i uszczelnij każdy koniec taśmą. Gdy mucha się obudzi i zacznie badać końcówkę pipety, usuń taśmę i szybko umieść końcówkę w rowku w pionowym uchwycie. Zabezpiecz chip na miejscu za pomocą skrzydełkowej, która zamyka dolną część końcówki.

Muchy zazwyczaj badają końcówkę przez 30 do 60 sekund. Gdy mucha zbliży się do szczytu końcówki, rozpocznij nagrywanie kamery tuż przed tym, jak mucha wyłoni się na platformie. Po tym, jak mucha pojawi się na platformie, odczekaj od jednej do dwóch sekund, a następnie włącz niebieskie diody LED. Użyj timera, aby ręcznie zmierzyć czas, aż mucha rozpocznie lot.

07:07

Optogenetyczne zaburzenia aktywności neuronalnej za pomocą oświetlenia laserowego u częściowo nienaruszonych larw Drosophila w ruchu

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

07:24

Połączenie ilościowych testów spożycia pokarmu i wymuszonej aktywacji neuronów w celu zbadania apetytu u Drosophila

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

06:49

Śledzenie zachowań larw Drosophila w odpowiedzi na optogenetyczną stymulację neuronów węchowych

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

09:12

Rodopsyna kanałowa2 Stymulacja potencjałów synaptycznych w połączeniach nerwowo-mięśniowych Drosophila

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

02:23

Zachowania nawigacyjne larw Drosophila w odpowiedzi na optogenetyczną stymulację węchowych neuronów czuciowych

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

08:03

Optogenetyczna stymulacja zachowań ucieczkowych u Drosophila melanogaster

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

13:44

Metoda wysokiej wierności optogenetycznej kontroli pojedynczych neuronów piramidowych in vivo

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

07:43

Fotostymulacja optogenetycznie ukierunkowana obwodów przodomózgowia ze skaningiem laserowym

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:13

Rozwarstwienie i barwienie immunofluorescencyjne neuronów ciała grzyba i fotoreceptorów w mózgach dorosłych Drosophila melanogaster

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

14:40

Optogenetyczna manipulacja aktywnością neuronalną w celu modulacji zachowania u swobodnie poruszających się myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

Ostatnia aktualizacja: 1 sierpnia 2026