JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 2:40 min. • April 30th, 2023
- Aby przetestować preferencje samicy muchy dotyczące składania jaj lub miejsc składania jaj, zapewnij pojedynczej samicy muchy wybór między dwoma różnymi podłożami, na których złoży jaja w komorze testowej. Mucha porówna dostępne opcje i wybierze preferowane przez siebie miejsca, zwykle podłoże najlepiej pasujące dla jej potomstwa.
Upewnij się, że mucha jest przygotowana do złożenia wielu jaj, aby w każdej próbie była solidna liczba jaj. Pod koniec eksperymentu usuń muchę i policz jaja na każdym podłożu, aby określić preferencje muchy dotyczące składania jaj.
W przykładowym protokole użyjemy testu o wysokiej przepustowości, aby przetestować preferencje dotyczące składania jaj dla zwykłych lub zawierających sacharozę substratów agarozowych.
- Kontynuuj eksperyment, uzyskując wcześniej zbudowane akrylowe komory do składania jaj. Włóż plastikowe arkusze do góry, ładując kawałek komory, aby służył jako dolna powierzchnia.
Następnie znieczul samice na podkładce z dwutlenkiem węgla i załaduj je pojedynczo do każdej areny składania jaj. Pozwól muchom na 30 minut, aby zregenerowały się po wydostaniu dwutlenku węgla i zaaklimatyzowały się w nowym środowisku. Podczas gdy muchy się dostosowują, napełnij tubkę agarozą do znaku 10 mililitrów. Następnie przygotuj 150-milimolowy substrat sacharozy, umieszczając w probówce 750 mikrolitrów 2-molowego roztworu sacharozy. Trzymaj butelkę stopionej 1% agarozy w łaźni wodnej.
Przygotuj zwykły substrat w ten sam sposób, ale zastąp roztwór sacharozy wodą destylowaną. Następnie należy pobrać fragment substratu z komory i odpipetować 1,000 mikrolitrów substratu agarozy do każdego koryta. Odłóż agarozę na bok do zestalenia się na 30 minut.
Gdy podłoża agarozowe i muchy będą gotowe, zmontuj wszystkie trzy części komory do składania jaj, a następnie wyjmij plastikowe arkusze. Umieść komory w inkubatorach much na noc.
Znieczulij samice, wstrzykując dwutlenek węgla do komory. Zdemontuj komorę i wyrzuć znieczulone muchy. Na koniec zrób zdjęcia jaj w celu prowadzenia dokumentacji.