C. elegans (C. elegans) Test przeżycia: test toksyczności krótkoterminowej

- Zacznij od przygotowania związku do badania pod kątem toksyczności i rozprowadź go w dołkach płytki testowej. Przenieś robaki w odpowiednim stadium rozwoju do każdej studzienki i natychmiast uruchom timer. Zwróć uwagę na wszystkie robaki, które są uszkodzone i nie uwzględniaj ich w swoich obliczeniach przetrwania.

Po określonym czasie policz liczbę robaków, które są jeszcze żywe w każdej studni. Jasne światło mikroskopu preparacyjnego lub delikatne stukanie w płytkę powinno spowodować ruch żywych robaków. Powtarzaj tę obserwację po każdym przedziale czasu, aż większość zwierząt będzie martwa. W poniższym protokole będziemy obserwować czas przeżycia larw L4 podczas ekspozycji na parakwat, związek wywołujący stres oksydacyjny.

- W tej demonstracji stres oksydacyjny zostanie wywołany za pomocą parakwatu. Przygotować świeży 100-milimolowy roztwór parakwatu, zgodnie z opisem w dołączonym tekście protokołu. Parakwat jest niebezpiecznym i wysoce toksycznym związkiem i należy się z nim obchodzić zgodnie z odpowiednimi wytycznymi.

Odpipetować 40 mikrolitrów roztworu parakwatu do każdego dołka na płytce 96-dołkowej. Użyj co najmniej 12 studzienek jako powtórzeń każdego badanego stanu. Za pomocą platynowego kilofa drucianego przenieś od pięciu do ośmiu larw L4 do każdej studzienki.

Należy wskazać czas rozpoczęcia i czas zakończenia dla każdego badanego warunku. Umieść 96-dołkową płytkę w temperaturze 20 stopni Celsjusza. Godzinę po rozpoczęciu oceń martwe i żywe zwierzęta za pomocą mikroskopu preparacyjnego. Delikatnie potrząśnij talerzem przed rozpoczęciem liczenia.

Robaki, które nie poruszają się nawet po zauważeniu światła o dużej intensywności, są oceniane jako martwe. Spójrz na kształt robaka, ogony i ruchy głowy w dużym powiększeniu, aby odróżnić martwe robaki od żywych robaków. Oceniaj przeżywalność co godzinę, dopóki większość robaków nie umrze, i powtarzaj ten test co najmniej trzy niezależne razy.

Aby określić procent przeżycia dla każdego punktu czasowego, najpierw oblicz całkowitą liczbę zwierząt w danym stanie, dodając całkowitą liczbę zwierząt przeniesionych do każdej studzienki. Zignoruj zwierzęta, które zostały uszkodzone lub zabite podczas przenoszenia. Następnie, dla każdego punktu czasowego, oblicz całkowitą liczbę martwych zwierząt w danym stanie. Oblicz procent zgonów i procent przeżycia.