JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 3:10 min. • April 30th, 2023
- Zacznij od jaj granulowanych, które zostały odizolowane przez bielenie dorosłych robaków. Upewnij się, że każdy etap tej procedury jest przeprowadzany sterylnie, aby uniknąć zanieczyszczenia hodowanych komórek. Zawieś osad w roztworze chitynazy, enzymu, który rozkłada chitynę - duży polisacharyd, który jest składnikiem strukturalnym skorupki jaja.
Po odpowiednim okresie trawienia delikatnie odwirować jaja i zastąpić supernatant pożywką do hodowli komórkowych, aby zatrzymać trawienie. Następnie przepuść zarodki przez igłę o rozmiarze 18, aby mechanicznie oddzielić poszczególne komórki. Następnie przefiltruj roztwór, aby usunąć zanieczyszczenia ze skorupki jajka lub nieoddzielone grudki komórek. Umieść komórki w naczyniu hodowlanym na szklanym szkiełku pokrytym aglutyniną z orzeszków ziemnych - lektyną, która pomaga komórkom przyczepić się do szkiełka nakrywkowego poprzez wiązanie węglowodanów na powierzchni komórki.
W przykładowym protokole przygotujemy komórki embrionalne do różnicowania i analizy morfologicznej in vitro.
- Podczas pracy pod okapem z przepływem laminarnym, aby uniknąć wprowadzenia zanieczyszczenia bakteryjnego, ponownie zawieś granulowane jaja w jednym mililitrze
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych