JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 2:23 min. • April 30th, 2023
- Umieść jednego transgenicznego robaka eksprymującego GCaMP - białko wykrywające wapń - w komorze obrazowania wraz z pokarmem bakteryjnym dla robaka. Następnie uszczelnij naczynie pokrywką i folią laboratoryjną, aby zapobiec parowaniu. Zobacz go pod mikroskopem złożonym wyposażonym w epifluorescencję szerokiego pola. Nagrywaj poklatkowe obrazy robaków, aby śledzić ich zachowanie i rejestrować fluorescencję za pomocą oprogramowania do obrazowania.
Transgeniczne robaki wyrażają białko czujnika GCaMP pod kontrolą promotora, który napędza ekspresję GCaMP w określonym neuronie. Kiedy ten neuron jest aktywowany, wystrzeliwuje potencjał czynnościowy, który depolaryzuje błonę plazmatyczną. Po depolaryzacji w błonie plazmatycznej otwierają się bramkowane napięciem kanały wapniowe. Powoduje to napływ jonów wapnia do komórki, co powoduje pobudzenie neuronów.
GCaMP w wzbudzonym neuronie wiąże jony wapnia. Powoduje to, że GCaMP fluoryzuje, gdy robaki są obrazowane za pomocą światła wzbudzającego fluorescencji o niskiej intensywności. W przykładowym protokole użyjemy obrazowania wapnia do wizualizacji aktywności interneuronów AVA u transgenicznych C. elegans w mikrokomorach agarozy.
- Obrazowan
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych