Karmienie FITC-dekstranem: metoda ilościowego określania przepuszczalności jelit u C. elegans

0 wyświetleń2:56 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- C. elegans jest stosowany jako eksperymentalny model zakażenia patogenami jelitowymi, które wywołują chorobę, częściowo poprzez przerwanie bariery jelitowej, zwiększając jej przepuszczalność. Aby określić ilościowo integralność bariery po ekspozycji na bakterie lub związek chemiczny będący przedmiotem zainteresowania, zbierz robaki, zmywając je z ich talerzy.

Następnie umieść te robaki na płytkach agarowych z oznakowaną żywnością składającą się z zabitych termicznie E. coli zmieszanych z dekstranem FITC, polisacharydem o wysokiej masie cząsteczkowej ze znacznikiem fluorescencyjnym.

Pozwól robakom zjeść oznaczone bakterie. Osoby z nienaruszonymi barierami jelitowymi szybko usuwają pokarm, podczas gdy u robaków z bardziej przepuszczalnymi jelitami marker fluorescencyjny przeniknie poza światło narządu.

Przenieś robaki do roztworu formaldehydu, aby naprawić zwierzęta. Po 1 do 2 minutach zastąp formaldehyd mediami montażowymi.

Na koniec zobrazuj robaki za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej. Należy pamiętać, że granulki jelitowe C. elegans są autofluorescencyjne, więc będzie sygnał tła. Ale ogólnie rzecz biorąc, większa fluorescencja jelitowa wskazuje na wyższą przepuszczalność.

W przykładowym protokole oznaczymy wpływ leczenia biomolekułą DIM na przepuszczalność jelit robaków zakażonych chorobotwórczymi bakteriami Pseudomonas aeruginosa.

- Przygotuj płytki uzupełnione dekstranem FITC, mieszając 2 mililitry inaktywowanej termicznie E. coli z 4 miligramami dekstranu FITC. Dodaj 100 mikrolitrów mieszaniny do każdej z 20 świeżych płytek agarowych NGM i pozostaw płytki do wyschnięcia na godzinę na czystym stole laboratoryjnym. Po 48 godzinach od zabiegu umyj robaki S Buffer. Przenieść je na płytki z dodatkiem FITC-dekstranu i na płytki NGM bez FITC-dekstranu i inkubować płytki przez noc.

Następnego dnia umyj robaki buforem S i pozwól im czołgać się w świeżej płytce agarowej NGM przez godzinę. Dodaj 50 mikrolitrów 4% formaldehydu do każdej studzienki czarnej 96-dołkowej płytki z płaskim dnem i przenieś około 50 robaków do każdej studzienki. Po 1 do 2 minutach usuń cały formaldehyd i dodaj 100 mikrolitrów podłoża montażowego do każdej studzienki.

- Formaldehyd jest toksyczną substancją chemiczną i należy obchodzić się z nim ostrożnie.

12:15

Jelito C. elegans jako model morfogenezy światła międzykomórkowego i biogenezy błony spolaryzowanej in vivo na poziomie pojedynczej komórki: znakowanie przez barwienie przeciwciałami, analiza utraty funkcji RNAi i obrazowanie

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

08:04

Pomiar przepuszczalności bariery nabłonkowej w organoidach jelitowych człowieka w czasie rzeczywistym

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:22

Metody in vitro i in vivo w celu określenia przepuszczalności komórek nabłonka jelitowego

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

09:44

Funkcjonalna ocena perystaltyki jelit i zapalenia ściany jelita u gryzoni: analizy w standaryzowanym modelu manipulacji jelit

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

02:45

Ocena przepuszczalności jelit u C. elegans po ekspozycji na bakterie

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

06:04

Ex vivo Pęcherzyki jelitowe do oceny przepuszczalności błony śluzowej w modelach chorób przewodu pokarmowego

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

08:58

Analiza korzystnego wpływu suplementów diety na funkcje bariery nabłonkowej jelit podczas eksperymentalnego zapalenia jelita grubego

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

07:23

Pomiar wpływu bakterii i substancji chemicznych na przepuszczalność jelit Caenorhabditis elegans

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

07:32

Podejście oparte na mikroskopii przyżyciowej do oceny przepuszczalności jelit i wydajności wydalania komórek nabłonkowych

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

09:24

Funkcjonalna ocena przepuszczalności jelit i migracji przeznabłonkowej neutrofili u myszy przy użyciu standaryzowanego modelu pętli jelitowej

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

Ostatnia aktualizacja: 1 sierpnia 2026