JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 2:56 min. • April 30th, 2023
- C. elegans jest stosowany jako eksperymentalny model zakażenia patogenami jelitowymi, które wywołują chorobę, częściowo poprzez przerwanie bariery jelitowej, zwiększając jej przepuszczalność. Aby określić ilościowo integralność bariery po ekspozycji na bakterie lub związek chemiczny będący przedmiotem zainteresowania, zbierz robaki, zmywając je z ich talerzy.
Następnie umieść te robaki na płytkach agarowych z oznakowaną żywnością składającą się z zabitych termicznie E. coli zmieszanych z dekstranem FITC, polisacharydem o wysokiej masie cząsteczkowej ze znacznikiem fluorescencyjnym.
Pozwól robakom zjeść oznaczone bakterie. Osoby z nienaruszonymi barierami jelitowymi szybko usuwają pokarm, podczas gdy u robaków z bardziej przepuszczalnymi jelitami marker fluorescencyjny przeniknie poza światło narządu.
Przenieś robaki do roztworu formaldehydu, aby naprawić zwierzęta. Po 1 do 2 minutach zastąp formaldehyd mediami montażowymi.
Na koniec zobrazuj robaki za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej. Należy pamiętać, że granulki jelitowe C. elegans są autofluorescencyjne, więc będzie sygnał tła. Ale ogólnie rzecz biorąc, większa fluorescencja jelitowa wskazuje na wyższą przepuszczalność.
W pr
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych