JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 3:59 min. • April 30th, 2023
- Aby przygotować się do wstrzyknięcia, użyj wykałaczki do robaków, aby położyć ślad oleju halowęglowego na podkładce agarozowej. Umieść robaki w oleju i unieruchamiaj je, delikatnie dociskając je do podkładki agarowej. Upewnij się, że olej całkowicie pokrywa zwierzęta. Umożliwia dotarcie tlenu do robaków, jednocześnie zapobiegając wysuszeniu. Następnie umieść podkładkę agarozową na mikroskopie iniekcyjnym i ustaw igłę prostopadle do robaka, celując w dystalny koniec ramienia gonady.
Delikatnie przepchnij igłę przez naskórek i wstrzyknij ramieniu gonady kwas nukleinowy lub związek będący przedmiotem zainteresowania. Każde ramię gonady zawiera syncytium linii zarodkowej, które rozwinie się w indywidualne oocyty. Materiał wstrzyknięty do gonady dystalnej zostanie włączony do tych oocytów i wpłynie na następne pokolenie.
Po wstrzyknięciu robaków należy wymienić olej na bufor M9. Gdy robaki zaczną się poruszać, przenieś je na płytkę agarową NGM z pokarmem bakteryjnym. W poniższym protokole metoda mikroiniekcji gonad jest stosowana do dostarczania kompleksu Cas9 w celu namierzenia i edycji genu dpy-10.
- Rozpocznij od przygotowania płatków C. elegans i agarozy, zgodnie z opisem w protok
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych