Naświetlanie promieniami UV: metoda integracji macierzy pozachromosomowych

- Tworzenie pozachromosomalnych macierzy DNA za pomocą mikroiniekcji - najprostszej metody generowania transgenicznych szczepów robaków - powoduje, że elementy genetyczne nie są stabilnie przenoszone podczas podziału komórki, a zatem wykazują zmienne tempo dziedziczenia i poziomy ekspresji. Celem integracji macierzy z chromosomem jest zmniejszenie tej genetycznej niestabilności i zmienności.

Aby to zrobić, zacznij od zsynchronizowanej z wiekiem populacji transgenicznych robaków L4, które przenoszą układ pozachromosomalny wprowadzony wcześniej przez mikroiniekcję i pozwalają im wyrosnąć na grawitacyjne dorosłe osobniki. Przenieś te dorosłe osobniki na nowe talerze i pozwól im złożyć jaja, aż na każdym talerzu będzie co najmniej 30 jaj. Usuń dorosłe osobniki i pozwól jajom dorosnąć, aż osiągną stadium L4. Następnie naświetl robaki światłem UV. Powoduje to losowe dwuniciowe pęknięcia w genomowym DNA, w których maszyneria naprawy DNA robaków może arbitralnie włączać macierz.

Po całonocnym okresie rekonwalescencji policz liczbę robaków, które przeżyły. Niewielki odsetek martwych robaków wskazuje na skuteczne napromieniowanie. Obserwuj kolejne pokolenia, aby wyizolować homozygotyczne zin