Rozwarstwienie soczewki oka: technika obserwacji morfologii soczewki danio pręgowanego

- Oko danio pręgowanego składa się z rogówki, twardówki, soczewki i siatkówki. Rogówka jest przezroczystą tkanką, która umożliwia przedostawanie się światła do oka. Twardówka jest nieprzezroczystą tkanką, która jest ciągła z rogówką, tworząc zewnętrzną warstwę ochronną. Soczewka jest sferyczną strukturą, która skupia światło na siatkówce, która jest wrażliwą na światło warstwą tkanki, która przekształca światło w sygnał nerwowy.

Aby wypreparować oko, napełnij szalkę Petriego silikonem i pozwól jej zastygnąć. Teraz umieść znieczuloną rybę w naczyniu i wytnij oczy za pomocą mikronożyczek. Przenieś oczy na płytkę wypełnioną PBS, aby utrzymać stałe pH w tkance i ustaw oko tak, aby tylna strona była skierowana do góry. Przytrzymaj oko kleszczami i ostrożnie wykonaj trzy promieniste nacięcia przez twardówkę i siatkówkę.

Następnie rozłóż chusteczkę, aby odsłonić soczewkę. Teraz ustaw oko przednią stroną skierowaną do góry i usuń twardówkę i siatkówkę. Wyjmij soczewkę z wypreparowanego oka i usuń wszelkie pozostałe tkanki wokół niej. W poniższym protokole przeprowadzimy sekcje soczewek larw i dorosłych danio pręgowanego w celu analizy morfologii soczewki.

Po potwierdzeniu wystarczającego uspokojenia tricainą, użyj nożyczek do mikrodysekcji, aby natychmiast wyciąć oba oczy od dorosłego lub larwalnego danio pręgowanego i umieść oba oczy na 35-milimetrowej szalce Petriego wykonanej na zamówienie z silikonową formą do preparacji wypełnioną PBS. Aby pobrać soczewkę od dorosłego danio pręgowanego, umieść oko tylną stroną do góry i włóż kleszcze pod kątem mniejszym niż 45 stopni przez dysk nerwu wzrokowego. Użyj nożyczek preparacyjnych, aby wykonać dwa lub trzy promieniste nacięcia przez siatkówkę i twardówkę od tarczy nerwu wzrokowego do strefy rzęskowej w unieruchomionym oku i odkleić siatkówkę i twardówkę jak płatki kwiatów. Odwróć oko, rogówką do góry i użyj płaskiej strony nożyczek, aby pośrednio unieruchomić soczewkę poprzez manipulację twardówką i rogówką, używając kleszczy do odciągnięcia siatkówki i przyczepionych tkanek. Następnie ostrożnie odetnij nadmiar tkanki z soczewki.

W przypadku zbierania soczewek larwalnych danio pręgowanego, odtwarza oko larwalne tylną stroną do góry na płaską część silikonowego naczynia PBS. I użyj zaostrzonej igły wolframowej, aby wykonać nacięcia radiowe przez siatkówkę i twardówkę, jednocześnie unieruchamiając oko inną igłą lub kleszczami. Następnie delikatnie zgarnij soczewkę z dysocjacyjnego oka stroną wykonanej na zamówienie igły z drutu wolframowego i ostrożnie odciągnij przyczepioną chusteczkę.