Inflacja atramentu w Indiach: metoda barwienia do wizualizacji guzków nowotworowych

Zacznij od umieszczenia uśpionej myszy brzuszną stroną do góry na łóżku chirurgicznym i zabezpieczenia kończyn zwierzęcia. Za pomocą nożyczek przetnij wzdłuż linii środkowej przez klatkę piersiową aż do gruczołów ślinowych. Umieść końcówkę pipety pod tchawicą, aby ją podnieść i odizolować. Obróć łóżko chirurgiczne o 180 stopni. Włożyć igłę strzykawki zawierającą plamę z atramentu indyjskiego do tchawicy i wstrzykiwać atrament do płuc, aż poczujesz opór.

Komórki rakowe wydzielają dużą ilość kwasu mlekowego, który generuje silny ładunek ujemny na powierzchni komórki. Kiedy te komórki są zabarwione atramentem indyjskim, kwaśną plamą, powierzchnia komórki odpycha plamę i pozostaje niezabarwiona.

Użyj nożyczek, aby przeciąć tchawicę i wsuń pęsetę pod płuca. Delikatnie wyciągnij płuca z ciała zwierzęcia. Wypłucz płuca w wodzie i przenieś je do fiolki zawierającej roztwór Fekete, aby usunąć nadmiar plamy i utrwalić tkankę w okapie. Guzki guza wydają się białe na ciemnym tle.

W poniższym protokole wykonamy technikę napełniania atramentem indyjskim w celu walidacji przerzutów do płuc.

Aby potwierdzić przerzuty guza pierwotnego do płuc, najpierw umieść mysz w pozycji leżącej na płycie styrop