Inflacja atramentu w Indiach: metoda barwienia do wizualizacji guzków nowotworowych

Zacznij od umieszczenia uśpionej myszy brzuszną stroną do góry na łóżku chirurgicznym i zabezpieczenia kończyn zwierzęcia. Za pomocą nożyczek przetnij wzdłuż linii środkowej przez klatkę piersiową aż do gruczołów ślinowych. Umieść końcówkę pipety pod tchawicą, aby ją podnieść i odizolować. Obróć łóżko chirurgiczne o 180 stopni. Włożyć igłę strzykawki zawierającą plamę z atramentu indyjskiego do tchawicy i wstrzykiwać atrament do płuc, aż poczujesz opór.

Komórki rakowe wydzielają dużą ilość kwasu mlekowego, który generuje silny ładunek ujemny na powierzchni komórki. Kiedy te komórki są zabarwione atramentem indyjskim, kwaśną plamą, powierzchnia komórki odpycha plamę i pozostaje niezabarwiona.

Użyj nożyczek, aby przeciąć tchawicę i wsuń pęsetę pod płuca. Delikatnie wyciągnij płuca z ciała zwierzęcia. Wypłucz płuca w wodzie i przenieś je do fiolki zawierającej roztwór Fekete, aby usunąć nadmiar plamy i utrwalić tkankę w okapie. Guzki guza wydają się białe na ciemnym tle.

W poniższym protokole wykonamy technikę napełniania atramentem indyjskim w celu walidacji przerzutów do płuc.

Aby potwierdzić przerzuty guza pierwotnego do płuc, najpierw umieść mysz w pozycji leżącej na płycie styropianowej i zabezpiecz nogi, aby zapewnić swobodny dostęp do tchawicy. Spryskaj mysz 70% etanolem. Następnie użyj nożyczek, aby wykonać nacięcie wzdłuż linii środkowej środkowego brzucha myszy przez klatkę piersiową i w górę w kierunku gruczołów ślinowych. Zidentyfikuj tchawicę. Następnie za pomocą kleszczy usuń otaczające tkanki.

Następnie, trzymając w jednej ręce końcówkę pipety, przeciągnij końcówkę pod tchawicę i delikatnie unieś tkankę do góry i odsuń ją od ciała. Trzymając tchawicę uniesioną, obróć platformę sekcyjną o 180 stopni. Następnie włóż do tchawicy strzykawkę tuberkulinową o pojemności pół cm3 27 i całkowicie napompuj płuca atramentem indyjskim, aż poczujesz silny opór.

Następnie za pomocą nożyczek przetnij tchawicę. Trzymając mysz w miejscu za pomocą jednego kleszcza, włóż kolejne kleszcze pod płuca i wyciągnij płaty płuc z myszy. Krótko przepłukać płuca w zlewce z wodą i przenieść tkankę do okapu wyciągowego. Następnie umieść płuca w szklanej fiolce scyntylacyjnej zawierającej 3 mililitry roztworu Fekete, zakrywając fiolkę, aby zapobiec parowaniu roztworu. Po kilku minutach przenieś płuca na szalkę Petriego i policz liczbę pojedynczych, białych, przerzutowych guzków nowotworowych.