Test ksenoprzeszczepu danio pręgowanego: metoda oceny skuteczności przeciwnowotworowej leków na rakotwórczość u danio pręgowanego in vivo

- Najpierw umieść jajka na szalce Petriego i dodaj roztwór Danieau, aby zachować świeżo zebrane jajka. Dodaj fenylotiomocznik, aby zahamować pigmentację i inkubować przez kilka dni. Po inkubacji odkorówkować zarodki za pomocą ostrych kleszczy i pozwolić im dalej rosnąć.

Następnie wysiewaj pożądaną liczbę komórek rakowych w kolbie hodowlanej i inkubuj przez noc. Teraz dodaj związki przeciwnowotworowe i kontynuuj inkubację. Po inkubacji dodaj fluorescencyjny barwnik śledzący komórki, który zwiąże się z błoną komórkową i zabarwi komórki.

Następnie dodaj trypsynę w celu dysocjacji komórek i rozcieńcz komórki w roztworze PBS czerwieni fenolowej przed zabiegiem oceny pH. Zamontuj znieczulone zarodki danio pręgowanego na płytce agarowej. Teraz załaduj mikrokapilę zawiesiną komórek rakowych i wstrzyknij ją do woreczka żółtkowego zarodków.

Przenieść zarodki na płytki hodowlane zawierające roztwór Danieau i kontynuować inkubację. Następnie przenieś kilka zarodków na szkiełko i dodaj metylocelulozę, aby je unieruchomić. Umieść szkiełko pod mikroskopem fluorescencyjnym i określ ilościowo rozmiar guza za pomocą oprogramowania.

Związki przeciwnowotworowe zwykle hamują zdolność komórek nowotworow