Test znakowania impulsowego bromodeoksyurydyny: technika pomiaru proliferacji komórek
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 3:59 min. • April 30th, 2023
- Zacznij od zawiesiny komórek białaczkowych zawierającej pożądaną gęstość komórek. Odwirować i ponownie zawiesić komórki w pożywce hodowlanej zawierającej surowicę. Dodatek surowicy sprzyja ciągłemu wzrostowi komórek, a komórki poruszają się w różnych fazach cyklu komórkowego. Rozcieńczyć komórki w roztworze znakującym bromodeoksyurydynę lub BrdU i hodować je w warunkach fizjologicznych przez wymagany czas.
Komórki w fazie syntezy lub S pobierają BrdU - analog tymidyny - który zastępuje tymidynę podczas procesu replikacji DNA. Odwirować komórki, aby usunąć nadmiar BrdU i ponownie zawiesić komórki w odpowiednim podłożu. Przenieś komórki na płytkę wielodołkową. Pozwól komórkom rosnąć w warunkach fizjologicznych przez różne okresy czasu.
W różnych okresach czasu komórki przechodzą przez pozostałą część faz S, G2, mitozy i G1 i wchodzą w następny cykl komórkowy, co pozwala na oszacowanie proliferacji komórek. Wykonaj barwienie przeciwciał, aby oznaczyć BrdU przeciwciałem fluorochromowym i zmierzyć proliferację komórek za pomocą cytometrii przepływowej.
Wewnątrz cytometru przepływowego fluorochromy pochłaniają energię lasera i fluoryzują. Liczba proliferujących komórek bezpośrednio kor
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych