JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 3:24 min. • April 30th, 2023
- Bromodeoksyurydyna lub BrdU jest syntetycznym analogiem nukleozydu tymidyny. Podczas fazy syntezy cyklu komórkowego BrdU zastępuje tymidynę i integruje się z nowo zsyntetyzowanym DNA. Wbudowany BrdU umożliwia śledzenie postępu cyklu komórkowego. Aby wykryć wbudowany BrdU, najpierw utrwal i przepuszczalnie komórki, aby uczynić je przepuszczalnymi.
Następnie potraktuj komórki enzymem DNAza, aby rozszczepić nici DNA i odsłonić włączone BrdU. Następnie dodać odpowiednie znakowane fluorescencyjnie przeciwciało anty-BrdU. Przeciwciało dostaje się do jądra i łatwo wiąże się z odsłoniętym BrdU obecnym w DNA.
Dodatkowo potraktuj komórki odpowiednim fluorescencyjnym barwnikiem wiążącym DNA. Barwnik wiąże się z DNA, umożliwiając ilościowe określenie całkowitej zawartości DNA. Użyj cytometrii przepływowej, aby wykryć fluorescencję zarówno ze znakowanego BrdU, jak i DNA.
Intensywność fluorescencji ze znakowanego DNA różnicuje komórki w różnych fazach cyklu komórkowego w oparciu o zmienność całkowitej zawartości DNA. Sygnał fluorescencyjny z BrdU identyfikuje aktualną pozycję komórek włączonych do BrdU w cyklu komórkowym.
W tym przykładzie przeprowadzimy barwienie immunofluorescencyjne BrdU ko
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych