JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 2:57 min. • April 30th, 2023
- Na początek dodaj trypsynę do płytki zawierającej komórki białaczkowe hodowane jednocześnie z komórkami zrębu szpiku kostnego w celu dysocjacji komórek. Odwirować i ponownie zawiesić osad za pomocą wstępnie podgrzanego podłoża, aby utrzymać żywotność komórek. Kolumna G-10 zawiera usieciowane kulki dekstranu, które pęcznieją w wodzie, tworząc matrycę żelową.
Zrównoważyć kolumnę G-10 wstępnie podgrzanymi mediami, aby wypełnić przestrzeń między kulkami, zapewniając powolne usuwanie mediów z kolumny. Utrzymuj odpowiednią temperaturę w kolumnie, aby zapobiec tworzeniu się pęcherzyków powietrza. Powoli załaduj mieszaninę komórek na kulki żelowe w kolumnie G-10. Inkubować komórki na kolumnie G-10 w temperaturze pokojowej przez żądany czas. W oparciu o charakterystykę i wielkość powierzchni komórek, kulki żelowe preferencyjnie ograniczają większe komórki zrębu szpiku kostnego, umożliwiając oddzielenie komórek białaczkowych.
Dodaj wstępnie podgrzane podłoże do kolumny i zbierz zawiesinę komórek białaczkowych. Odwirować zawiesinę komórek i ponownie zawiesić osad w odpowiednim buforze. Do dalszej analizy wykorzystaj czystą populację komórek białaczkowych. W poniższym przykładzie oddzielimy czystą populację komórek białaczkowych od kokultury zrębu za pomocą kolumny G-10.
- Przy całkowicie zamkniętym kurku dla każdej subpopulacji, użyj pipety o pojemności 1000 mikrolitrów, aby dodać całą objętość komórek o objętości 1 mililitra, kroplami, na wierzch jednej z przygotowanych kolumn G-10, upewniając się, że komórki pozostają na wierzchu lub wewnątrz granulki G-10. Pozostawić komórki do inkubacji na osadzie G-10 przez 20 minut w temperaturze pokojowej. Następnie dodaj od 1 do 3 mililitrów świeżej, wstępnie podgrzanej pożywki do kolumny i otwórz kurek tak, aby pożywka powoli opuszczała kolumny w dół.
Kontynuuj dodawanie wstępnie podgrzanego podłoża do kolumn w odstępach od 1 do 2 mililitrów. Po zebraniu łącznie od 15 do 20 mililitrów komórek białaczkowych zamknij kran i zakręć probówkę zbiorczą. Następnie odwiruj ogniwa i ponownie zawieś osad w odpowiednim buforze do dalszej analizy.