Barwienie May-Grunwald Giemsa: metoda barwienia komórek szpiku kostnego

- May-Grunwald Giemsa, czyli barwienie MGG, to dwuetapowa procedura różnicowego barwienia komórek szpiku kostnego lub BMC. Aby rozpocząć barwienie, należy uzyskać skoncentrowany jednowarstwowy rozmaz BMC na szkiełku podstawowym. Pozostaw rozmaz do wyschnięcia na powietrzu. Najpierw potraktuj komórki barwnikiem majowo-grunwaldzkim zawierającym eozynę i błękit metylenowy rozpuszczony w metanolu.

Rozpuszczalnik metanol początkowo unieruchamia komórki. Błękit metylenowy, zasadowy barwnik o dodatnim ładunku netto, barwi kwaśne składniki komórkowe, takie jak kwasy nukleinowe. Eozyna, kwaśny barwnik z ujemnym ładunkiem netto, barwi podstawowe składniki komórkowe, takie jak cytoplazmatyczne białka kationowe. Potraktuj komórki roztworem buforowym o pH 6,8, aby barwnik mógł się wytrącić i dobrze związać z materiałami komórkowymi.

Dodatkowo potraktuj komórki barwnikiem Giemsa, zawierającym również barwniki kwasowe i zasadowe, aby wzmocnić ogólny efekt barwienia. Barwniki podstawowe, lazur i błękit metylenowy, intensyfikują plamę składników kwasowych, podczas gdy barwnik kwasowy, eozyna, wzmacnia plamę składników zasadowych.

Pod mikroskopem erytrocyty wydają się różowo-brązowe, a płytki krwi jako małe fioletowe kropki. Granulocyty mają fioletowo-niebieskie wielopłatkowe jądro i czerwoną granulowaną cytoplazmę. Agranulocyty są jasnoniebieskie z dużym fioletowo-różowym jądrem. W poniższym protokole pokazujemy barwienie MGG komórek szpiku kostnego.

- Aby przygotować komórki szpiku kostnego do barwienia, najpierw umieść je w jednorazowych komorach z wstępnie dołączonymi kartami filtracyjnymi, a następnie umieść komory w cytowirówce. Dodać 100 mikrolitrów buforu FACS do każdej komory karty filtracyjnej i krótko odwirować szkiełka. Pod koniec wirowania dodaj 100 mikrolitrów komórek do każdej komory i odwiruj komórki.

Następnie ostrożnie wyjmij szkiełka z komór w celu wysuszenia na powietrzu. Aby wybarwić komórki szpiku kostnego, zanurz szkiełka w słoiku Coplin zawierającym roztwór May-Grunwald na 5 minut. Następnie przenieś szkiełka do słoika z roztworem buforowym o pH 6,8 na 1 minutę. Następnie przenieś szkiełka do roztworu Giemsa R na 10 minut, a następnie przemyj je przez 10 sekund wodą o neutralnym pH.

Po umyciu pozostaw szkiełka do wyschnięcia na powietrzu i nałóż jedną kroplę podłoża montażowego na każdą próbkę. Następnie umieść jedną krawędź szkła nakrywkowego na szkiełku podstawowym i ostrożnie opuść szkło nakrywkowe na komórki, delikatnie dociskając, aby usunąć wszelkie pęcherzyki powietrza.