JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 4:25 min. • April 30th, 2023
- W komórkach białaczkowych transport makrocząsteczek, takich jak kilka białek tłumiących guz między jądrem a cytoplazmą, jest rozregulowany. Błędna lokalizacja tych białek sprawia, że są one nieaktywne, co powoduje niekontrolowany wzrost komórek białaczkowych. Możemy określić nieprawidłową lokalizację takich białek, generując frakcję cytoplazmatyczną i jądrową z komórek białaczkowych.
Zacznij od pobrania żądanej objętości komórek białaczkowych do probówki z mikrofugą i odwirowania w celu osadzenia komórki. Ponownie zawiesić osad w hipotonicznym buforze do lizy, a następnie dodać żądane stężenie detergentu. Hipotoniczny bufor do lizy powoduje, że komórki pęcznieją i pękają błonę plazmatyczną, pozostawiając błonę jądrową nienaruszoną, izolując w ten sposób frakcje cytoplazmatyczne. Detergent pomaga w ekstrakcji białek z organelli cytoplazmatycznych.
Odwirować zlizane komórki w zawiesinie i przenieść supernatant do świeżej probówki. Supernatant zawiera frakcję cytoplazmatyczną komórki. Aby przygotować frakcję jądrową, należy ponownie zawiesić pozostały osad w pełnym buforze do lizy i dodać detergent. Odwirować i zebrać frakcję jądrową obecną w supernatancie do probówki do mikrodymki.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych