Generowanie komórek dendrytycznych pochodzących ze szpiku kostnego: metoda generowania komórek dendrytycznych ze szpiku kostnego myszy

- Komórki dendrytyczne lub DC są kluczowymi komórkami prezentującymi antygen, które aktywują limfocyty T. U pacjentów z białaczką komórki te słabo wyrażają antygen związany z nowotworem i nie wywołują specyficznej dla antygenu odpowiedzi immunologicznej. Komórki dendrytyczne są obfite w szpiku kostnym. W związku z tym szpik kostny jest preferowanym miejscem ich izolacji, aby pomóc w badaniu ich roli w raku.

Aby uzyskać komórki dendrytyczne, należy pobrać szpik kostny z kości udowej lub piszczelowej myszy poddanej eutanazji za pomocą strzykawki wypełnionej pożywką, aby go wypłukać. Odwirować i ponownie zawiesić osad w buforze amonowo-chlorkowo-potasowym lub ACK w celu lizy erytrocytów. Teraz dodaj pożywkę hodowlaną, aby zatrzymać lizę i odwirować. Zawiesić osad w pożywce hodowlanej zawierającej antybiotyk. Dodać czynnik stymulujący tworzenie kolonii granulocytów i makrofagów lub GM-CSF i przenieść zawiesinę komórkową na płytkę Petriego.

Inkubuj płytkę przez żądany czas. GM-CSF pomaga komórkom progenitorowym różnicować się w komórki dendrytyczne. Na koniec aktywuj komórki za pomocą lipopolisacharydów lub LPS, które wiążą się z receptorem powierzchniowym komórek dendrytycznych, w wyni