JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 4:57 min. • April 30th, 2023
- Czynniki transkrypcyjne to białka, które wiążą się z określonym miejscem w DNA w celu regulacji ekspresji genów. Błędy w czynnikach transkrypcyjnych zmieniają tę aktywność, prowadząc do nadmiernej ekspresji genów, co powoduje raka. Aby zrozumieć rolę czynników transkrypcyjnych i regulacji genów, możemy przeprowadzić test immunoprecypitacji chromatyny lub CHIP, a ścinanie chromatyny jest ważnym krokiem w przepływie pracy CHIP.
W celu ścinania chromatyny ustabilizuj kompleks DNA-białko, dodając formaldehyd. Formaldehyd łączy białka z powiązaną sekwencją DNA, tworząc wiązania kowalencyjne. Następnie użyj odpowiedniego buforu do lizy komórek w celu uwolnienia chromatyny zawierającej usieciowane kompleksy DNA-białko i odwiruj. Ścinać chromatynę za pomocą enzymu nukleazy mikrokokowej. Enzym ten rozszczepia chromatynę między nukleosomami i trawi luźne końce DNA. Odwirować mieszaninę i zebrać supernatant.
Załaduj supernatant na żel agarozowy TBE, aby przeanalizować odpowiednią wielkość fragmentów DNA. Zastosuj pole elektryczne w poprzek żelu, co powoduje, że ujemnie naładowane DNA chromatyny przemieszcza się w kierunku anody. Mniejsze fragmenty przemieszczają się dalej w dół żelu. Ścięta
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych