JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 6:29 min. • April 30th, 2023
- Immunoprecypitacja chromatyny lub ChIP to technika stosowana do określania interakcji białko-DNA w komórkach. Białka wiążą się z określonymi miejscami na DNA i regulują ekspresję genów. Najpierw ustabilizuj kompleks DNA-białko za pomocą formaldehydu. Formaldehyd łączy białka z powiązaną sekwencją DNA, tworząc wiązania kowalencyjne.
Następnie użyj odpowiedniego buforu do lizy komórek w celu uwolnienia chromatyny zawierającej usieciowane kompleksy DNA-białko. Odwirować zawiesinę i poddać sonikacji supernatant w celu uzyskania fragmentów chromatyny. Następnie oznacz próbkę odpowiednim przeciwciałem, które wiąże się specyficznie z białkiem związanym z DNA.
Dodaj specjalistyczne kulki magnetyczne do próbki. Koralik rozpoznaje przeciwciało i wiąże się z nim. Użyj magnesu, aby zebrać kulki magnetyczne z kompleksem przeciwciało-białko-DNA. Przemyć próbkę w celu usunięcia niezwiązanej chromatyny lub przeciwciał. Dodaj bufor o wysokim stężeniu soli do kompleksu i inkubuj w wyższych temperaturach, aby odwrócić wiązania krzyżowe białek DNA.
Za pomocą magnesu zbierz supernatant zawierający DNA i białka. Dodaj enzym proteinazę K, aby zdegradować białka w próbce. Dodaj odpowiedni bufor do wytrą
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych