JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 5:21 min. • April 30th, 2023
- Hematopoetyczne komórki macierzyste i progenitorowe lub HSPC, mogą samoodnawiać się i różnicować w różne typy komórek krwi. HSPC stopniowo gromadzą mutacje DNA w ciągu życia, co może przyczyniać się do białaczki. Aby przeanalizować takie mutacje, HSPC są zwykle generowane ze szpiku kostnego.
Zacznij od dodania przeciwciał sprzężonych z fluoroforem do komórek jednojądrzastych - dorosłych komórek macierzystych wyizolowanych ze szpiku kostnego - i inkubacji ich przez pożądany czas. Przeciwciała wiążą się ze specyficznymi markerami powierzchni komórek, takimi jak CD34. Teraz załaduj mieszaninę do cytometrii komórkowej aktywowanej fluorescencją lub maszyny FACS.
Przeciwciała sprzężone z fluoroforem fluoryzują po uderzeniu laserem. Poszczególne kropelki komórek przechodzą przez detektor, który mierzy intensywność fluorescencji, na podstawie której kropla posiada ładunek elektryczny. W obecności pól elektromagnetycznych dodatnio naładowane ogniwa przemieszczają się do pojemnika ujemnego i odwrotnie.
Teraz hoduj posortowane przez FACS CD34-dodatnie HSPC w odpowiednim podłożu przez żądany czas, aż pojawią się klony. Następnie usuń klony przez energiczne pipetowanie i odwirowanie, aby osad
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych