Sortowanie komórek aktywowane magnetycznie: metoda izolowania komórek C-Kit dodatnich

- c-Kit lub CD117 to transbłonowy receptor kinazy tyrozynowej wyrażany przez hematopoetyczne komórki macierzyste lub progenitorowe obecne w szpiku kostnym i krwi. Jest również markerem do wykrywania ostrej białaczki szpikowej.

Aby wyizolować komórki c-Kit dodatnie, zbierz kości nóg myszy i zmiażdż je, aby uwolnić szpik od wewnątrz. Przefiltrować zawiesinę szpiku kostnego, aby usunąć wszelkie fragmenty kości. Warstwę filtratu zawierającego komórki szpiku kostnego należy umieścić na pożywce o gradiencie gęstości i odwirować w celu oddzielenia komórek jednojądrzastych od innych frakcji.

Zebrać mętną warstwę komórek jednojądrzastych w probówce zawierającej mikrogranulki sprzężone z mysimi przeciwciałami anty-CD117. Inkubuj kompleksy przeciwciało-kulki, aby związać się z receptorami CD117 na komórkach c-Kit dodatnich. Przepuścić inkubowaną zawiesinę przez kolumnę magnetyczną umieszczoną w polu magnetycznym. Wszystkie dodatnie komórki c-Kit znakowane mikrokulkami magnetycznymi pozostają w kolumnie, podczas gdy nieznakowane komórki przechodzą przez nią.

Usuń kolumnę z pola magnetycznego i przepłucz zawartość za pomocą odpowiedniego buforu w celu elucji dodatnich komórek c-Kit. W poniższym