Test CFU na bazie metylocelulozy: metoda określania wpływu związków przeciwnowotworowych na tworzenie kolonii w komórkach białaczkowych

- Czasami komórka macierzysta lub progenitorowa ulega mutacjom, w wyniku których powstaje białaczkowa komórka macierzysta. W tych komórkach niektóre białka są regulowane w górę, a stosowanie związków przeciwnowotworowych przeciwko takim białkom może pomóc w kontrolowaniu wzrostu komórek. Działanie tych związków przeciwnowotworowych można analizować za pomocą testu CFU, monitorując liczbę i wielkość tworzonych kolonii.

Zacznij od pobrania komórek progenitorowych od myszy chorej na białaczkę i rozcieńczenia ich w odpowiedniej pożywce hodowlanej. Dodaj tę zawiesinę komórkową wraz z odpowiednim związkiem przeciwnowotworowym do metylocelulozy zawierającej cytokiny specyficzne dla myszy i wlej ją na szalkę Petriego. Inkubuj tę mieszaninę, aż pojawią się kolonie. Metyloceluloza jest chemicznie obojętną, półstałą matrycą, która zapobiega migracji komórek, podczas gdy cytokiny stymulują komórki progenitorowe do różnicowania się i tworzenia kolonii zawierających rozpoznawalne potomstwo.

Następnie wybarwić kolonie za pomocą chlorku jodonitrotetrazolowego lub INT i inkubować przez noc, aż kolonie zmienią kolor na ciemnoczerwonawo-brązowy. Enzymy mitochondrialne redukują żółty barwnik INT do cz