Fluorescencyjnie znakowana izolacja komórek T-ALL: metoda izolacji komórek T-ALL od dorosłych danio pręgowanego

- Ostra białaczka limfoblastyczna z komórek T lub T-ALL to rodzaj nowotworu, który występuje, gdy limfocyty nie dojrzewają i pozostają jako niedojrzałe komórki zwane limfoblastami. Te nieprawidłowe komórki są nieskuteczne w zwalczaniu infekcji. Ponieważ te niedojrzałe komórki dzielą się szybko, przewyższają liczebnie zdrowe komórki krwi i mogą przemieszczać się do narządów, takich jak śledziona, wątroba i OUN.

Guzy u danio pręgowanego są podobne do tych powstających u ludzi. Dlatego danio pręgowany jest preferowanym modelem do generowania komórek nowotworowych T-ALL.

Zacznij od wybrania przekształconych ryb, które wykazują sygnały fluorescencyjne, wskazujące na rozprzestrzenianie się komórek nowotworowych. Usuń głowę uśpionej ryby i umyj jamę ciała roztworem heparyny, aby usunąć nadmiar czerwonych krwinek. Teraz należy wstrzyknąć odpowiedni bufor do jamy organizmu. Zastosuj delikatny nacisk z zewnątrz i zbierz bufor zawierający komórki nowotworowe w probówce do mikrofuge.

Zabarwić komórki błękitem trypanowym i obserwować je pod mikroskopem. Żywe komórki nowotworowe wydają się fluorescencyjne i bezbarwne po zabarwieniu błękitem trypanowym, ponieważ ujemnie naładowana błona komórkowa